论文部分内容阅读
目的:探讨不同构型吉法酯对干眼症大鼠的保护作用。方法:Wistar雌鼠(40只,160-180 g),随机分为正常对照组和模型组。模型组通过连续28天皮下注射东莨菪碱氢溴酸盐联合风扇模拟高流通性、低湿度环境的方法制备大鼠干眼症模型,正常对照组给予同等剂量的生理盐水。通过Shirmer I试验,角膜荧光素钠染色筛选成功模型。成功模型随机分为4组:Vehicle组、4Z吉法酯治疗组、4E吉法酯治疗组、4Z+4E吉法酯治疗组。各治疗组眼表分别给予1%各构型吉法酯滴眼,Vehicle组及正常对照组给予等量含0.5%吐温-80的生理盐水,于治疗后第7、14天进行Shirmer I试验评价泪液体积、角膜荧光素钠染色评价角膜损伤情况,第14天取材后使用HE染色评价角膜形态学改变,PAS染色计算结膜杯状细胞密度,Western Blot检测泪腺中基质金属蛋白酶9(MMP9)与凋亡相关的蛋白质Bad、Bax、Cleaved-caspase 3、Bcl 2的表达情况,并且通过免疫组织化学观察炎症因子MMP9及黏蛋白MUC5AC在角膜的表达情况。结果:与正常对照组相比,模型组大鼠泪液体积明显降低(P<0.05),角膜荧光素钠染色评分明显增加(P<0.05),且角膜上层细胞分界不清,鳞状化明显,基底细胞排列不紧密,结膜杯状细胞明显减少(P<0.05),泪腺促凋亡蛋白Bax、Bad、Cleaved-caspase 3及MMP9蛋白表达明显上调(P<0.05),抗凋亡蛋白Bcl2表达下调,眼表粘蛋白MUC5AC表达明显减少,MMP9明显增多(P<0.05)。各构型吉法酯治疗后均能明显使干眼症大鼠泪液体积增加(P<0.05)、角膜荧光素钠染色评分减少(P<0.05),角膜上层细胞有不同程度的病理改变减弱趋势,结膜杯状细胞密度明显增加(P<0.05)、抑制促凋亡蛋白Bad(P<0.05)、Bax(P<0.01)、Cleaved-caspase 3(P<0.01)的表达,上调抗凋亡蛋白Bcl 2的表达方面(P<0.01)均有不同程度的作用,且能明显减少泪腺和眼表MMP9的表达(P<0.05),增强眼表黏蛋白MUC5AC的表达(P<0.05)。与4Z构型相比,4E构型吉法酯在增加泪液体积(P<0.05)、降低角膜荧光素钠染色评分(P<0.05)和增加结膜杯状细胞数量(P<0.05)方面有着明显的优势,下调泪腺中Cleaved-caspase 3(P<0.01)、Bax(P<0.05)、Bad(P<0.05)和炎症因子MMP9和上调泪腺中Bcl 2(P<0.01)及眼表MUC5AC的表达上有着更加突出的效果。结论:4Z构型和4E构型的吉法酯对干眼症大鼠均有保护作用,且4E构型优于4Z构型。