应用磺酸化聚苯乙烯纳米磁珠检测猪肉中的克伦特罗

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克伦特罗(Clenbuterol, CLE)等β2-受体激动剂可显著增强动物(如牛、猪、羊、家禽等)体内的脂肪分解代谢,促进蛋白质合成并提高瘦肉率,因而该类物质常被不法分子大量添加于饲料中,以促进家畜生长和提高瘦肉率。虽然世界各国制定了相应的法律法规和标准禁止其使用,但由于经济利益的驱使,CLE的滥用仍然屡禁不止。本研究采用细乳液共聚法,一步合成了磺酸化聚苯乙烯纳米磁珠;以该磁性材料为吸附剂,建立了基于磁分散固相萃取技术的动物源性食品中CLE的快速富集、净化方法;将该新型样品前处理方法与免疫层析试纸条定量方法相结合,建立了猪肉中CLE的高灵敏度快速定量分析方法。本论文主要包括以下研究内容:1)功能化磁珠的合成采用化学共沉淀方法制备Fe304纳米颗粒,并用油酸、十一烯酸对所得纳米颗粒进行表面改性。采用细乳液共聚法,以苯乙烯和对苯乙烯磺酸钠为单体分子,通过优化两种单体的用量成功合成了表面磺酸基密度较高的磺酸化聚苯乙烯纳米磁珠。采用透射电镜(TEM)以及电位滴定仪对磺酸化磁珠进行表征,结果表明:磁珠的粒径分布范围为110-150 nm,磺酸基密度为4.8 μmol/mg。2)克伦特罗磁分散固相萃取方法的建立以磺酸化聚苯乙烯磁珠为吸附剂,通过对吸附和洗脱条件的优化建立了水溶液中CLE的磁分散固相萃取方法。分别考察了吸附体系pH值、盐离子以及甲醇浓度对吸附效率的影响,结果表明:当pH值为6.0-12.0时,磁珠对CLE有较好的吸附,在pH7.0时,CLE的吸附效率最高,达到90%以上;在最佳pH条件下,NaCl浓度为0-1 mol/L时,吸附效率随盐浓度的增加而减少;但当NaCl浓度大于1 mol/L时,磁珠对CLE的吸附效率重新上升,当NaCl浓度达到3 mol/L时,磁珠对CLE的吸附效率大于90%;甲醇可抑制磁珠对CLE的吸附,当甲醇浓度大于40%时,磁珠不能吸附CLE。洗脱条件优化的结果表明,5%氨化甲醇可有效洗脱吸附在磁珠表面的CLE。对25℃,最佳吸附条件下磁珠吸附CLE的等温吸附曲线的研究表明,该吸附行为符合Langmuir模型,最大吸附容量为0.41mg/g, Langmuir吸附平衡常数KL为147.90 L/mg。3)建立磁分散固相萃取结合胶体金免疫层析试纸条定量检测猪肉中克伦特罗的方法将磁分散固相萃取技术结合胶体金免疫层析试纸条相,建立了基于T/C比值法定量检测猪肉样本中CLE残留的新方法。用25 mL 0.01M的HCl水溶液提取5g猪肉中的CLE,取3g提取液加入25 mg磺酸化聚苯乙烯纳米磁珠吸附,5%氨化甲醇洗脱,洗脱液经氮吹后,200μL 0.01 M PBS复溶,用胶体金免疫层析试纸条定量检测CLE含量。结果显示,基于磁分散固相萃取的胶体金免疫层析试纸条定量检测法最低检测限为0.10 ng/mL,定量限为0.24 ng/mL;0.25 ng/g、0.5ng/g以及1.0 ng/g的加标回收实验显示,三个浓度下的加标回收率介于93.0%-97.7%,批内变异系数为3.2%-13.0%(n=3),批间变异系数为9.2%-12.1%(n=3)。进一步将该检测方法应用于经LC/MS/MS确证为CLE阳性的9个实际猪肉样本检测,比对结果显示,本研究所建检测方法与确证方法的检测结果具有较好的相关性。
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