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α-甘露糖苷酶是蛋白质糖基化中一类重要的酶，与肿瘤发生发展的关系十分密切。由于本实验室克隆到一个新的人α-甘露糖苷酶基因(6A8)，因此对其与肿瘤发生发展的关系作了研究。我们用反义技术抑制人鼻咽癌细胞株CNE-2L2中6A8 α-甘露糖苷酶的表达，建立了6A8 α-甘露糖苷酶表达抑制的克隆细胞株AS，用转导无关DNA(UN)或空载体(M)的细胞及野生型(W)细胞作对照，比较了AS细胞在体内和体外的恶性生物学行为。本论文工作的第一步是把细胞接种于裸鼠皮下，观察细胞的肿瘤性生长和所长肿瘤的肺转移，以确定6A8 α-甘露糖苷酶表达抑制对CNE-2L2恶性生物学行为的影响。 细胞接种裸鼠皮下所长肿瘤的生长曲线表明，6A8 α-甘露糖苷酶表达低下的细胞(AS)的生长较对照组[转导空载体(M)、转导无关DNA片段(UN)及野生型(W)]细胞显著减慢。细胞接种后第8周末，W、M、UN与AS细胞所长肿瘤的平均重量分别为7.55±3.61、8.97±0.97、8.95±4.50、0.95±0.77克，所长肿瘤的肺转移率分别为60％、44％、56％、10％。以上结果表明，6A8 α-甘露糖苷酶表达低下的AS细胞的恶性生物学行为显著抑制。 这样，我就建立了恶性行为(生长、转移)不同的鼻咽癌细胞株：高恶性行为的W、M及UN细胞和低恶性行为的AS细胞。我首先用DDRT-PCR方法分析了AS细胞和W细胞间差异表达的基因。DDRT-PCR结果显示共有58条差异显示条带，其中45条在AS中高表达，而另外13条则在W中高表达。将差异表达的EST片段行DNA测序，将所得序列与GenBank的非重复序列(nr)及EST数据库以BLAST软件(Blastn)做比较，见其中23条EST序列与已知基因高度同源，故认为这些EST代表的是已知基因。另有8条EST虽找不到相应的已知基因，但藉同源EST拼接，拼接出了有开放阅读框的cDNA。剩余的27条EST则无同源的EST序列，无法拼接出相应的cDNA。 尽管电子拼接方法可拼接出cDNA，但它是否确实存在于组织中，首先要用Northern印迹检验。我挑选17条EST(其中包括10条已知基因和7条可同源拼接的