论文部分内容阅读
胆管癌(Cholangiocarcinoma,CCA)是起源于肝内,门周或远端胆道树上皮细胞的恶性肿瘤。由于胆管癌起病隐匿,早期诊断困难,临床症状出现较晚,流行病学研究表明,只有10-15%的患者有可能通过手术治愈,而许多患者发现即为晚期,但术后复发率仍为50-60%,五年存活率仅仅30%。在胆管癌治疗中,人类表皮生长因子受体2(Human Epidermalgrowth factor Receptor 2,HER2)被认为是潜在的药物靶点。有研究显示在胆管癌中存在HER2的过表达,HER2的过表达在胆管癌的发生和进一步的致癌到晚期和肿瘤转移过程中有着重要的促进作用,被认为参与了胆管癌的多级的癌变过程。因此可以将HER2为胆管癌靶标分子开展一系列研究。已经有研究表明,Affibody分子有着极好的靶向HER2的能力。体内和体外的研究均证实了偶联了 Affibody的纳米颗粒对表达HER2的细胞和肿瘤有着高度靶向特异性。近年来,脂质体由于其高药物装载率、高生物稳定性、低毒性及易于进行表面功能化修饰等诸多优点,被成功应用于临床检测和各种疾病的治疗。此外,光热治疗(photothermaltherapy,PTT)凭借其局部、高效、副作用小等优势,迅速成为了肿瘤治疗领域的热点。在本研究中,基于对真核细胞信号肽介导的膜蛋白分选转运机制和生物表面活化剂的特性的理解,我们通过基因工程改造了 Affibody分子,在其N端加上膜定位信号肽,C端与跨膜肽、绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein,GFP)进行基因序列的融合,将该基因序列连接整合到真核表达质粒载体,用该载体转染细胞后,成功将Sig-Affibody-GFP融合蛋白表达在宿主细胞膜上,再通过生物表面活化剂诱导,我们成功提取到一种新型的基因工程改造的纳米囊泡(genetically engineered nanovesicles,GENVs)。它由来源于细胞膜的磷脂双分子层、通过信号肽分选定位到膜上的重组蛋白Sig-Affibody-GFP和可以控制颗粒大小和强度的生物表面活化剂等这些组分自组装构成。将纯化后的GENVs装载光敏剂喷哚菁绿(Indocyanine Green,ICG),尾静脉注射胆管癌SK-chA-1荷瘤裸鼠进行光热治疗,我们发现经过基因工程修饰Affibody多肽的纳米囊泡在体内对胆管癌肿瘤区域有着显著的靶向效果,并可通过光热治疗成功实现对肿瘤的完全消融。