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本研究以自备分离纯化大豆抗原蛋白作实验材料,采用小鼠肠上皮细胞原代培养技术,实验研究了纯化大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白对小鼠肠上皮细胞生理功能及生化参数的影响,并在细胞分子水平探索了抗原蛋白对吸收(转运)相关基因表达的影响。1.大豆球蛋白和β—伴球蛋白分离制备。根据大豆7S和11S球蛋白在pH6.1-6.6之间溶解度不同的特点,先对脱脂大豆中两种球蛋白进行初步分离,然后利用硫酸铵进行盐析和凝胶过滤,除去非抗原蛋白组分,得到纯度相对较高的大豆球蛋白和p一伴球蛋白。实验制备结果表明：脱脂大豆(豆粕)在0.03mMTris-HCl、料液比1：20、PH8.0的室温条件下提取2h,豆粕总蛋白提取率为32.88%,能得到蛋白质含量为71.5%的11S粗组分和蛋白质含量60.7%的7S粗组分。粗提取产物经盐析和凝胶过滤,可得到蛋白含量84.2%的纯化大豆球蛋白,和蛋白含量79.5%的纯化β—伴球蛋白。2.自备大豆球蛋白和β—伴球蛋白的细胞培养实验。利用细胞培养技术,设计三个实验研究了不同水平纯化大豆球蛋白、β-伴球蛋白(0、1 mg/ml、5 mg/ml、10 mg/ml)对体外培养原代小鼠肠上皮细胞完整性、细胞生物学功能及对基因表达的影响。实验结果表明：大豆球蛋白、β—伴球蛋白显著降低体外培养的小鼠肠上皮细胞数量,极显著影响细胞MTT OD值(P<0.01)。细胞培养过程提高大豆球蛋白、β—伴球蛋白含量,显著增加培养液中乳酸脱氢酶、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶、细胞Na+-K+-ATP酶活性及一氧化氮、IL-2、IL-6、IL-8含量(P<0.05),显著降低细胞蛋白含量、蛋白沉积量、细胞谷草转氨酶活性(P<0.05)。大豆球蛋白、β—伴球蛋白不影响培养液中NH3含量(P>0.05)。细胞分子水平的实验结果表明,β—伴球蛋白、大豆球蛋白均降低PEPT1和DMT1基因的表达量。β—伴球蛋白显著降低PEPT1基因表达(P<0.05),高剂量β—伴球蛋白的影响更显著。β—伴球蛋白对DMT1的基因表达的影响明显大于大豆球蛋白的影响。本论文实验研究表明,豆粕抗原蛋白显著影响细胞营养生理功能。β—伴球蛋白的作用明显大于大豆球蛋白。β—伴球蛋白抑制消化道上皮细胞与主要营养物质(蛋白质)吸收相关基因(PEPT1)表达的作用强于抑制无机离子转运相关基因(DMT1)表达的作用。大豆抗原蛋白造成的细胞分子水平的实质变化是引起肠上皮细胞生理功能完整性变化、细胞生理生化参数显著变化、造成细胞增殖能力降低,引起肠道炎性细胞因子(IL-2、IL-6、IL-8)水平显著变化的主要原因。