家蚕先天免疫反应主要包括体液免疫、细胞免疫和黑化反应。体液免疫表现为产生抗菌肽抵御微生物入侵,这需要通过Toll或Imd信号通路的关键转录因子Dorsal/Dif或Relish的激活来实现。但正常情况下,这种免疫应答通路的激活会受到体内相应的负调控机制调控,从而抑制免疫系统过度激活,保持机体免疫稳态。对双翅目昆虫的模式生物果蝇的相关研究表明,通过突变、敲除或转基因干涉等手段,已发现了多种使免疫系统核转录因子活性降低或阻止其入核的免疫稳态调控分子。在鳞翅目昆虫中,该项研究仍是空白。因此,对其模式生物家蚕在免疫稳态方面的研究就成为免疫系统的研究重点。本研究针对已筛选到的可能的免疫稳态分子BmFAF进行了特征分析、功能鉴定、作用机制研究和关键结构域分析。通过多序列比对、时空表达谱和免疫诱导表达谱构建,确定其免疫稳态调控分子特征；通过在细胞和个体水平干涉或过表达BmFAF等生物学技术,对其负调控特征进行了实验验证；通过免疫沉淀、GST-pull down、Western Blotting和酶活检测等手段探究了其发挥功能的作用机制和关键结构域。主要研究结果如下：1、BmFAF是家蚕免疫稳态调控分子基于家蚕数据库中通过多序列比对筛选到的免疫稳态调控分子,重点对编号为BGIBMGA008874的BmFAF进行了特征分析和功能鉴定。BmFAF在家蚕免疫组织中肠和脂肪体中表达量较低,在眠蚕期表达量总是显著高于起蚕期；家蚕受微生物感染0.5 h后,BmFAF即显著下调表达,相应抗菌肽CecropinAl则上调表达,表明该分子具有免疫负调控分子的特征；细胞水平过表达BmFAF,抗菌肽Attacin、Moricin、CecropinAl显著下调,细胞水平有效干涉BmFAF,抗菌肽Moricin、 CecropinAl显著上调；个体水平干涉BmFAF,抗菌肽Attacin、Moricin、CecropinAl显著上调,且个体存活率显著升高。细胞和个体水平的干涉和过表达实验进一步表明该分子负调控抗菌肽的表达。2、BmFAF通过相互作用促进Relishact泛素化降解负调控IMD信号通路通过Western blottin g、相对荧光素酶活性检测等手段在家蚕细胞水平验证Dredd能够切割Relish-FL使其成为成熟体Relishact,从而上调下游的抗菌肽表达,而BmFAF的存在使得这种上调效果减弱。进一步研究表明,BmFAF通过抑制Relishact的活性抑制NF-κB通路,在蛋白水平而非nRNA水平促进Relishact通过泛素化蛋白酶体途径降解,从而降低抗菌肽的表达。通过GST pull down和免疫沉淀实验证明,BmFAF具有自泛素化现象,能够结合泛素化的蛋白,通过物理性相互作用促使Relishact泛素化降解从而抑制其活性。3、UBA结构域是BmFAF发挥负调控功能的关键结构域构建BmFAF的5个截短突变基因片段的真核表达载体,通过Western blotting、相对荧光素酶活性检测等手段证明BmFAF通过其UBA结构域抑制Relishact的活性,从而降低抗菌肽的表达。通过免疫沉淀实验证明,BmFAF全长与含UBA结构域的截短突变体自身发生泛素化现象,且泛素化程度与其抑制Relishact活性的能力成正相关。