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黄瓜(CucumissativusL.),属葫芦科甜瓜属1年生攀缘草本植物,具有产量高、效益好等特点,栽培面积和消费量很大,是世界各国普遍栽培的重要蔬菜作物之一。组织培养是黄瓜进行无性繁殖和种质资源保存的有效途径,也是进行基因转化研究的基础,组织培养过程中产生体细胞无性系变异的特点可为黄瓜抗性育种和多倍体育种创造新的有价值的种质资源。本论文以黄瓜ND420、ND105、ND226、国农14号和国农22号为试料,对影响黄瓜组织培养的诸因素进行了系统的研究,建立了黄瓜离体子叶愈伤途径、离体子叶节直接不定芽途径和离体真叶胚状体途径再生体系,获得再生植株,其中离体子叶节再生体系为最优的高效再生体系,主要结果如下:
1以黄瓜子叶为材料,诱导产生愈伤组织及不定芽,建立再生体系。筛选出了适于愈伤组织及不定芽诱导的最佳培养基MS+1.0mg·L-1BAP+0.05~0.1mg·L-1NAA+3.0%蔗糖+0.6%琼脂。愈伤组织诱导率达到75%以上,不定芽诱导率22%左右。植物激素、基因型、外植体及接种方式对黄瓜子叶不定芽诱导有较大影响。1~3d龄子叶以近轴端垂直插入培养基的接种方式最有利于不定芽诱导。适宜浓度的硝酸银(2~4mg·L-1)和脱落酸(0.5mg·L-1)可促进3~5d龄子叶不定芽诱导。光照时间也对不定芽诱导有影响,光周期15h·d-1和10h·d-1及遮光时间0d和3d的不定芽诱导率较高。
2以黄瓜子叶节为材料,诱导直接不定芽,建立高频再生体系。筛选出直接不定芽诱导最佳培养基MS+0.5mg·L-1BAP+3.0%蔗糖+0.6%琼脂,直接不定芽诱导率达90%~100%。外植体大小对诱导率影响很大,单片完整子叶大小的子叶节为最佳外植体。2.0mg·L-1硝酸银促进直接不定芽的诱导。光照时间较短的光周期处理和遮光时间较长的处理能显著促进黄瓜子叶节直接不定芽的伸长。
3以黄瓜真叶为材料,诱导胚性愈伤及胚状体,建立再生体系。胚性愈伤诱导最适宜激素组合是MS+2.0mg·L-12,4-D+1.0mg·L-1BAP+0.5mg·L-1NAA+6.0%蔗糖+0.6%琼脂,胚状体诱导最适宜激素组合是MS+1.0mg·L-1BAP+0.5mg·L-1NAA+6.0%蔗糖+0.6%琼脂,胚状体形成培养基是不加激素的MS+3.0%蔗糖+0.6%琼脂,胚性愈伤和胚状体诱导率达到60%左右。ND105的最适宜胚状体诱导外植体为子叶,ND420和国农14号的最适宜胚状体诱导外植体为真叶。胚性愈伤诱导阶段较高浓度(6.0%)蔗糖和适宜浓度(2.0mg·L-1)脱落酸及赤霉素均能显著提高诱导率。
4生根培养最佳培养基为MS+3.0%蔗糖+0.6%琼脂,附加生长素的效果不好,3.0%的蔗糖浓度诱导生根好于较高或较低浓度,MS生根效果好于1/2MS。