论文部分内容阅读
背景和目的： 尖锐湿疣(condyloma acuminatum,CA)是由HPV（human papilloma virus，HPV）感染引起的性传播疾病，主要通过性接触传染，少数也可因非性接触感染。HPV为双链环状闭合DNA病毒，目前发现其有100多种亚型，人是其惟一宿主，低危型HPV-6、11型是CA常见病原体。CA临床上多表现为生殖器部位皮肤黏膜乳头瘤状、菜花状赘生物，该病增生快、传染性强。传统的物理疗法如CO2激光、电离子、冷冻、微波等治疗仅能清除疣体，无法根除HPV病毒，导致其临床上治疗后易复发，严重影响患者的生活质量。艾拉-光动力疗法（5-aminolevulinic acid photodynamic therapy,ALA-PDT）是一种治疗CA的新方法，具有疗效好、安全性高、复发率低等优点。该疗法目前在临床上已得到广泛的应用，但ALA-PDT治疗CA的作用机制尚缺乏系统深入研究，尤其是ALA-PDT对抑制CA血管形成和增殖及其对二者相互关系的影响研究甚少。缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)是细胞适应缺氧环境的主要转录因子，可诱导释放促血管生成剂，如血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)。VEGF是新生血管、血管形成最强有力的调控因子；增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)是反映细胞增殖活性的指标。本实验通过研究ALA-PDT对CA组织中HIF-1α、VEGF和PCNA的表达影响，探讨ALA-PDT对CA组织血管生成和增殖的影响，以丰富ALA-PDT治疗CA的理论机制，为ALA-PDT治疗CA提供更多的理论依据。 材料与方法： 1.材料 纳入本研究的对象是56例CA患者，2016年10月至2017年9月期间就诊于郑州大学第一附属医院皮肤科门诊。在入选的患者中，男30例，女26例，年龄19-65岁，平均34.55岁；病程2周至3月，平均50.32天。男性患者疣体多位于阴茎、包皮、系带、肛周等部位，女性皮损主要分布在会阴、阴道口等部位。患者临床表现典型，醋酸白试验阳性，组织病理符合CA的典型病理改变。患者均系初次就诊，无其他系统性疾病。 2.方法 ALA-PDT治疗前于局部麻醉下切取CA组织为对照组，同法于ALA-PDT治疗1周后取疣体组织作为实验组。应用免疫组化SP法，对治疗前后疣体组织中HIF-1α、VEGF及PCNA的表达情况进行检测。HIF-1α主要表达于细胞质，细胞核少量表达，VEGF仅表达于细胞质，PCNA阳性表达定位于细胞核，三者阳性表现均为淡黄色至棕褐色颗粒样物质。参照阳性细胞的着色强度和百分比对指标进行分级评分，未着色为0分；浅黄色1分；黄色2分；棕黄或棕褐色3分；阳性细胞所占百分比：0、1、2、3、4分依次对应≤10％、11％～25％、26％～50％、51％～75％、≥76％。分别算出各自的评分后相乘得出总分，最终分数：9-12分代表强阳性(+++)，6-8分代表阳性(++)，1-4分代表弱阳性(+)，0分代表阴性(-)。 3.统计学处理 应用SPSS17.0统计软件分析实验所得数据，x2检验比较ALT-PDT治疗前后HIF-1α、VEGF和PCNA阳性表达率的差异；阳性表达强差异采用秩和检验，HIF-1α、VEGF与PCNA治疗后的关联性采用Spearman分析方法，当P＜0.05时表示差异有统计学意义。 结果： 1.ALA-PDT治疗前后CA组织中HIF-1α的表达 ALA-PDT治疗前，56例CA患者中45例HIF-1α呈阳性表达，阳性表达率为78.57%(45/56)，表达强度多为++～+++；治疗后HIF-1α阳性表达为30例，阳性表达率为53.57%（30/56），表达强度多为-～+；两组间HIF-1α阳性表达率有统计学差异(x2=9.081,P＜0.05)，两组间HIF-1α阳性表达强度有统计学差异（H=11.604，P＜0.05)。 2.ALA-PDT治疗前和治疗后CA组织中VEGF的表达 ALA-PDT治疗前，56例CA患者中40例VEGF呈阳性表达，阳性表达率为71.43%(40/56)，表达强度多为++～+++；治疗后VEGF阳性表达为25例，阳性表达率为44.64%（25/56），表达强度多为-～+；两组间VEGF阳性表达率有统计学差异(x2=8.249,P＜0.05)，两组间VEGF阳性表达强度有统计学差异（H=11.285，P＜0.05)。 3.ALA-PDT治疗前和治疗后CA组织中PCNA的表达 ALA-PDT治疗前，56例CA患者中41例PCNA呈阳性表达，阳性表达率为73.21%(41/56)，表达强度多为++～+++；治疗后CA组织细胞中PCNA阳性表达为23例，阳性表达率为41.07%（23/46），PCNA表达强度多为-～+；两组间PCNA阳性表达率有统计学差异(x2=11.813,P＜0.05)，两组间PCNA阳性表达强度有统计学差异（H=12.223，P＜0.05)。 4.ALA-PDT治疗后HIF-1α和PCNA在CA组织细胞中表达的相关性 治疗后56例CA患者中HIF-1α阳性表达者30例，阴性26例；PCNA阳性表达23例，阴性33例。治疗后56例CA组织中HIF-1α和PCNA表达呈正相关(r=0.413，P＜0.05)。 5.ALA-PDT治疗前后VEGF和PCNA在CA组织细胞中表达的相关性 治疗后56例CA患者中VEGF阳性表达25例，阴性31例；PCNA阳性表达23例，阴性33例。治疗后CA组织中VEGF和PCNA表达呈正相关(r=0.273，P＜0.05)。 结论： 1.ALA-PDT治疗后CA组织中HIF-1α、VEGF的阳性表达率和表达强度均明显降低，提示ALA-PDT可抑制CA组织血管生成，抑制血管生成是ALA-PDT治疗CA的作用机制之一。 2.ALA-PDT治疗后CA组织中PCNA的阳性表达率和表达强度均明显降低，表明ALA-PDT可抑制CA组织角质形成细胞的增殖。 3.ALA-PDT治疗后CA组织中HIF-1α、VEGF与PCNA表达均呈正相关，提示抑制血管生成和抑制角质形成细胞的增殖对CA消退有共同促进作用。