Massilia sp.WF1对菲的降解特性研究

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多环芳烃(PAHs)是环境中分布十分广泛的一类疏水性持久性有机污染物,易在土壤中累积并通过食物链传递,其“三致效应”和生物毒性对生态环境及人体健康危害很大。菲是三环的多环芳烃,在环境中检出率高,由于其具有致癌PAHs相似的区域结构K-region和Bay-region而成为PAHs污染研究的模式物质。研究表明,微生物降解是消除环境中PAHs的最主要方式,因此对菲的生物修复研究可为PAHs污染环境的生物修复提供相应的理论依据和技术指导。本论文以分离筛选到的一株菲高效降解菌为研究对象,,探究其对菲降解的最佳条件、降解途径及在污染土壤中的修复潜力,同时应用高通量测序技术研究了该降解菌对土壤微生物群落结构的影响,旨在将降解菌更好地应用于有效而可控的生物修复中。主要的研究结果如下:(1)从PAHs污染的土壤中分离到一株菲的高效降解菌WF1,经形态学观察、生理生化特征分析和16S rDNA及gyrB基因序列鉴定,确定WF1属于Massilia sp.。(2) WF1有较强的环境适应能力,在温度(20-35℃)、pH(5-8)、菲初始浓度(25-400 mg L-1)条件下均能够降解菲,不过WF1在温度28℃、pH 6、菲初始浓度100 mg L-1条件下菲的降解效果最好,48 h菲的降解率达96.78%。不同碳源添加处理中菲的降解动力学均符合Gompertz方程,但外加碳源对菲的降解有不同的影响作用。葡萄糖、柠檬酸和琥珀酸的添加均会不同程度地加快菲的降解,而乳酸的添加则会明显抑制菲的降解,果糖、蔗糖、乳糖、水杨酸、邻苯二甲酸对菲的降解并没有显著的影响。(3) GC-MS分析测得WF1降解菲过程中的两种中间代谢产物1-羟基-2-萘甲酸和邻苯二甲酸,但与以往报道的常规途径不同,WF1并不再继续代谢邻苯二甲酸。(4)WF1添加处理和对照处理的污染土壤中,新添加的高浓度菲均被较快速地降解,但当污染物菲在土壤中老化后浓度降至5 mg kg-1左右,其生物有效性降低,降解变缓慢。其中WF1添加处理从0天培养到第3天,菲的残留浓度由84.41 mg kg-1快速减少至16.41 mg kg-1;对照处理从第5天培养到第7天,菲的残留浓度由56.00 mg kg-1快速下降到22.01 mg kg-1;而叠氮化钠添加处理从第3天培养到第28天菲基本保持在47.79-60.45 mg kg-1。(5) 高通量测序结果表明,对照处理中土著微生物Mycobacterium属的丰度随菲的降解而增高,在菲降解最快的阶段(第7天)其丰度最高;叠氮化钠添加处理随着培养时间的延长,多数菌属丰度并没有明显的变化,仅Bacillus属在培养过程中持续增加;而WF1添加处理中Massilia属在菲降解最快的阶段(第3天)丰度最高,其丰度增减与菲的降解快慢具有耦合关系。同时微生物群落结构差异分析表明,WFl的添加在修复后期并不会造成原始污染土壤中微生物群落结构太大的改变,环境安全性高,可作为理想的修复菌剂应用于PAHs污染的环境修复中。
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