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目的: 本研究旨在观察在卵巢癌来源的外泌体对小鼠骨髓来源DC细胞(BMDCs)抗原提呈功能的作用。通过检测DC表型变化及分泌IL-10、IL-12的变化,探讨卵巢癌外泌体抑制小鼠骨髓来源DC细胞抗原提呈功能的可能机制。 方法: 1.超速离心法提取卵巢癌细胞A2780外泌体,采用电子透射显微镜观察外泌体形态;反复冻融法提取外泌体总蛋白;BCA法测定外泌体总蛋白的浓度;蛋白质印记法检测外泌体的特异性表面标志CD81、TSG101。2.分离小鼠骨髓细胞,细胞因子rmGM-CSF和 rmIL-4联合诱导培养DC细胞(BMDCs),用光学显微镜观察 BMDCs的生物学形态,流式细胞术检测 BMDCs的纯度。3.外泌体蛋白处理DC细胞,流式细胞术检测DC表面共刺激分子CD40、CD83、CD86和MHCⅡ的表达变化;4.流式细胞术检测外泌体对DC细胞抗原摄取能力的影响;5.酶联免疫吸附法检测 DC细胞分泌IL-10和IL-12的变化。 结果: 1.电子透射显微镜下观察到卵巢癌A2780细胞分泌的外泌体呈圆形膜状结构,直径约为30-100nm;经蛋白质免疫印迹试验鉴定外泌体的特异性表面标志CD81、TSG101;BCA法测定外泌体蛋白浓度为50μg/ml。2.BMDC细胞培养至第7 d时,悬浮细胞大量聚集,表面突起伸长,是树突状细胞典型形态。BMDCs细胞表面 CD11c的表达量达(70±1.8)%。3.外泌体影响DC细胞表面共刺激分子 CD40、CD83、CD86和 MHCⅡ的表达,与对照组相比,经过外泌体蛋白处理后的DC细胞表面 CD40、CD83、CD86和 MHCⅡ的表达量明显下降(P<0.05,n=8),DC分泌 IL-10增多,IL-12分泌下降(P<0.05,n=8)。4.与对照组相比,经过外泌体蛋白处理后的DC的抗原摄取能力无显著性差异(P>0.05,n=8)。 结论: 卵巢癌分泌外泌体抑制小鼠BMDCs细胞表面分子CD40、CD83、CD86和MHCⅡ的表达,但对其抗原摄取能力没有影响。卵巢癌外泌体可能通过促进 DC分泌 IL-10,抑制DC分泌IL-12,抑制BMDCs的抗原提呈功能,参与卵巢癌的进展。