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体液标本中播散肿瘤细胞的检测作为一种相对无创的液体活检方式已广泛用于肿瘤的早期诊断、治疗指导、复发与转移评估,对肿瘤的个体化治疗及预后评估等具有重要临床意义。尤其是对于一些难以耐受活检等侵入式检查和难以获得肿瘤组织标本的患者,该检查显得尤为重要。目前,播散肿瘤细胞检测面临最大的挑战是其在外周血和体液中的含量非常低,现有方法无法实现灵敏检测。因此,本课题设计了基于适体识别靶细胞并触发细胞表面原位滚环扩增的新方法用于体液中稀有肿瘤细胞的高灵敏检测。 本课题以乳腺癌细胞MCF-7为模式检测对象,设计一条上皮细胞黏附分子(EpCAM)适体-引物复合探针,其中适体部分作为识别元件特异地识别结合EpCAM阳性肿瘤细胞,随后引物部分可触发细胞表面原位滚环扩增,产生大量富含鸟嘌呤的G四联体序列。G-四联体/hemin D N A酶折叠形成后可以催化比色反应实现肿瘤细胞的检测。在混有不同浓度靶细胞的悬液(细胞总数为105个)中,本方法得到的最低检测限为10个肿瘤细胞,即低至0.01%的靶细胞仍可被检出。针对10例临床体液标本检测(包括5例良性体液标本和5例不同来源的恶性体液标本),该方法展示了良好的特异性和临床适用性。本文建立的基于适体识别靶细胞触发表面滚环扩增的肿瘤细胞检测新方法具有简单快速、灵敏度髙、特异性好的优点;并成功用于临床体液标本中稀有肿瘤细胞的检测。该方法为外周血或体液中稀有肿瘤细胞的检测提供了新的技术支持,具有广阔的临床应用前景。