目的:构建stathmin特异性siRNA质粒表达载体,探讨stathmin特异性siRNA质粒表达载体对鼻咽癌5-8F细胞stathmin基因的表达是否具有沉默作用,同时研究沉默stathmin基因对鼻咽癌5-8F细胞的细胞周期及凋亡的影响。方法:合成用于stathmin基因特异性表达的DNA干扰片段,经退火形成双链DNA片段,将获得的双链DNA片段连接到已经线性化的质粒表达载体pGenesil 1.1上。重组质粒导入大肠杆菌JM109菌株进行筛选与扩增,采用双酶切和测序对重组的质粒表达载体进行鉴定。研究细胞分组:1)脂质体组(脂质体试剂);2)阴性对照组(转染pGenesil 1.1-HK);3)stathmin特异性组(转染pGenesil 1.1-STM),应用脂质体将鉴定后的重组表达质粒载体转入鼻咽癌5-8F细胞,48h后收集细胞,提取总RNA和总蛋白分别进行RT-PCR与Western blot分析3组细胞中stathmin基因在mRNA及蛋白水平的表达,同时在48h后收集以上3组鼻咽癌细胞作流式细胞分析。结果:经酶切和测序鉴定,插入siRNA质粒表达载体的stathmin特异性碱基序列和方向正确,在mRNA及蛋白水平上均能有效降低stathmin基因在鼻咽癌5-8F细胞中的表达,流式细胞分析结果示STM组和脂质体组与阴性对照组比较,G2期细胞百分比例(21.27±0.76%)和细胞凋亡数百分比例(9.20±1.03%)均显著增加(P<0.05)。结论:我们成功的构建了stathmin基因siRNA质粒表达载体,能有效地沉默stathmin基因,通过沉默stathmin基因使鼻咽癌5-8F细胞凋亡数增加并出现G2期阻滞现象,此为鼻咽癌的基因治疗提供了理论基础。