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目的构建两种人CD59基因突变的重组体pALTER-MAX-CD59,转染入HeLa细胞,筛选高表达人突变CD59的阳性细胞克隆,检测HeLa细胞中突变CD59对肿瘤逃逸相关分子(caspase-3)的抑制效应及突变人CD59的补体抑制活性,研究CD59基因突变与肿瘤逃逸的相关性,进一步证实人CD59与肿瘤逃逸相关的活性位点,为肿瘤逃逸机制的进一步阐明提供新的理论依据。方法用重组聚合酶链反应定点诱变技术构建第40位色氨酸缺失的人的CD59突变体(突变1)和第39-41位氨基酸突变为色氨酸的人的CD59突变体(突变2);与pALTER-MAX质粒连接后,用阳离子脂质体法转染入HeLa细胞,以新霉素类似物G418筛选阳性细胞克隆,以免疫荧光、免疫酶标、ELISA、Western-blot、流式细胞术进一步筛选高表达突变人CD59的细胞株,用免疫组化法检测转染人突变CD59的细胞中肿瘤逃逸相关分子caspase-3的表达变化,用乳酸脱氢酶(LDH)测试法检测突变人CD59的抗补体活性。结果酶切鉴定及序列测定均证实成功构建了两种人CD59基因突变的重组质粒;免疫荧光、免疫酶标、ELISA、Western-blot、流式细胞术筛选出高表达突变人CD59的细胞株;免疫组化检测发现转染突变1后的HeLa细胞中caspase-3的含量较转染野生型人CD59的HeLa细胞中的caspase-3的含量明显增加,转染突变2后的HeLa细胞中caspase-3的含量较转染野生型人CD59的HeLa细胞中的caspase-3的含量明显减少。LDH法检测转染突变CD59后HeLa细胞具有抗补体活性,但其活性减弱。结论成功构建了两种CD59突变的重组质粒,并获得高表达两种突变CD59的HeLa细胞株,初步研究了CD59基因突变后抗补体活性改变及caspase-3的变化,证实了CD59引起肿瘤逃逸的途径除了通过调节其抗补体活性来影响MAC的形成外还能通过影响caspase-3的表达来实现。