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目的:制备大鼠脊髓损伤模型,研究Wnt-3a信号蛋白对脊髓损伤修复作用;探讨Wnt-3a信号蛋白激活Wnt信号途径,促进内源性神经干细胞增殖分化的作用机理。方法:①成年雌性S.D大鼠40只,体重200-250g,分成两组:对照组(Group1, n=20), Wnt-3a信号蛋白治疗组(Group2, n=20)。②利用Allen法在T10节段制备大鼠脊髓损伤模型;实验组脊髓损伤后3天在损伤区域注入Wnt-3a蛋白重组体,对照组在同样区域注入等量生理盐水。③脊髓损伤后24小时﹑7、14﹑21、28天进行BBB(Basso-Beattie-Bresnahan)评分检测脊髓损伤后大鼠行为学改变。④分别在脊髓损伤后14天﹑28天处死等量动物(n=4),4%多聚甲醛灌注固定,石蜡包埋、切片后,HE染色,光镜下比较两组间脊髓组织形态学变化;为观察两组间脊髓损伤后超微结构的变化,需将损伤节段脊髓先固定于2.5%的戊二醛中,透视电镜下观察结果。⑤同样在脊髓损伤后14天﹑28天处死等量动物(n=4),灌注前48小时腹腔注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU),常规冰冻切片后,行免疫荧光组织化学方法,观察内源性神经干细胞的存活、增殖、分化等情况。BrdU标记增殖的神经干细胞; MAP-2标记神经元; GFAP标记星形胶质细胞;随机计数8个400倍镜下视野下BrdU+/ MAP-2+双阳性细胞数或BrdU+/GFAP+双阳性细胞数,取平均值获得结果。结果:①脊髓损伤后14天,Wnt-3a蛋白治疗组BBB评分开始高于对照组,差异具有显著性(实验组:10.32±1.12,对照组:8.64±1.00; p<0.05)。到脊髓损伤后28天,两组之间的差异性更加明显(实验组:16.94±1.18,对照组:9.89±1.29;p<0.01)。②脊髓损伤后14天,损伤治疗组(group 2)HE染色组织学形态稍好于损伤对照组。到脊髓损伤后28天,损伤治疗组组织形态学基本接近正常脊髓组织。电镜观察显示损伤治疗组(group 2)在损伤后14天轴索变性程度明显好于损伤对照组。到脊髓损伤后28天,损伤治疗组超微结构明显好转,只可见少量轴索变性,轴浆内线粒体肿胀情形明显减轻,绝大部分可见嵴突。③免疫组织化学结果:在脊髓损伤后14天,损伤治疗组BrdU+/ MAP-2+双阳性细胞数和或BrdU+/GFAP+双阳性细胞数与对照组有显著性差异(P<0.05)。这表明Wnt-3a蛋白治疗组诱导内源性神经干细胞分化的神经元比对照组明显增多。但是,在脊髓损伤后28天,两组之间双阳细胞数差异性不明显(P>0.05)。结论:①脊髓损伤区域施加Wnt-3a信号蛋白可以激活Wnt信号途径,促进内源性神经干细胞分化为神经元以及髓鞘再生,同时抑制内源性神经干细胞分化为星形胶质细胞。②BBB评分显示伤后28天Wnt-3a蛋白治疗组评分明显高于对照组,说明脊髓损伤区域施加Wnt-3a信号蛋白可以促进脊髓功能有一定程度的恢复。