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为了用科学的方法证明中国传统食品能调节人体的免疫系统,本实验选取不同温、凉、平性的20种食品分为4组(五果、五蔬、五谷、五肉),每组5种食品,每种食品由随机抽取的3位受试志愿者食用。第一天所有受试志愿者统一饮食统一作息规律,只食用无偏性配餐,第二天在无偏性配餐基础上食用受试食品,采取自身血样作为对照,使用Millipore human kit通过液体芯片系统检测EGF,Eotaxin,FGF-2,Flt-3L,Fractalkine,G-CSF,GM-CSF,GRO,IFN-α2,IFN-γ,IL-1α,IL-1β,IL-1Ra,IL-2,IL-2Ra,IL-3,IL-4,IL-6,IL-7,IL-8,IL-9,IL-10,IL-12(p40),IL-2(p70),IL-13,IL-15,IL-17,IP-10,MCP-1,MCP-3,MDC,MIP-1α,MIP-1β,s CD40L,TGF-α,TNF-α,TFN-β,VEGF38种人细胞因子的浓度。在20种食品实验结果的基础上选取有代表性的6种食品和7种细胞因子进行实验,每种食品由3位受试志愿者食用。采取自身血样作为对照,使用Quanti Gene Plex 2.0 Assay检测m RNA,Millipore human kit结合Luminex200液体芯片系统检测Eotaxin,GRO,IL-6,IL-8,MCP-1,MDC,s CD40L七种人体细胞因子的浓度。20种食品的实验结果:食用温性食品如桔子、狗肉、羊肉、黑米、姜汤等后趋化因子类MCP-1,MDC,s CD40L,IP-10,IL-8,Flt-3L和发炎细胞因子IL-6,IL-1β的浓度显著升高,IL-4,TGF-α,Fractalkine的浓度显著降低;食用寒性食品如梨、苦瓜、冬瓜、黄米、糯米、绿豆、鸭肉后IL-4,IL-1ra,IL-10等抗炎细胞因子的浓度显著增加,Eotaxin,G-CSF,GRO,IFN-α2,MDC,IL-3等炎症细胞因子的浓度显著降低。6种食品的实验结果:食用橙子后GRO m RNA浓度显著降低,GRO蛋白浓度显著升高,食用枣后s CD40L m RNA浓度和s CD40L蛋白浓度都显著升高。结论:1.志愿者食用所给的20种食品后,细胞因子水平有不同程度的变化,表明食品确实可以通过胃肠粘膜系统对机体的免疫状态产生调节。而且食用食品后引起细胞因子变化所产生的总体效果(加强、抑制或平衡免疫反应)使得该食品表现出性温、性寒、性平的属性。归经现象说明免疫细胞、细胞因子网络的循行路线暗合了经络的路线。2.食品经消化后产生的磷脂类和内源性物质与未成熟的DC细胞上TLR2/TLR4或是CLRs受体结合,通过My D88依赖和非依赖信号途径激活转录因子AP-1和NF-κB释放IL-1β,IL-6,IL-8,IFN-γ,TNF-α,GRO等炎症细胞因子,这些炎症细胞因子被树突细胞呈递给Th0细胞,激活NF-κB、JNK、P38/MAPK途径,产生IL-2,IL-3,IL-6,IL-7,IL-10等细胞因子,这些细胞因子与免疫细胞和机体其他部位的非免疫细胞上相应的受体结合,通过激活NF-κB,JNK,P38/MAPK,STAT,PI3K,PKC等途径产生相应的细胞因子,调节机体的免疫状态。果蔬类食品中的植物非营养成分(Phytochemical)能抑制NF-κB和MAPK途径显著降低炎症细胞因子和趋化因子的浓度。3.“中心法则”(基因→RNA→蛋白质)看上去给人传递了一种信息:一个基因产生一种蛋白。实际上产生这种蛋白质的基因有很多个,这些基因分布在不同组织的不同细胞内,对这种蛋白的总量(尤其是在血液系统中)都有贡献不能简单把血液中一种蛋白的变化归因于某一种或几种移动细胞(固定细胞和移动细胞)内基因的变化,而要考虑其他固定细胞分泌的蛋白对血液中总蛋白的贡献作用。GRO可以由血液中的单核细胞产生,也可以由很多固定细胞(内皮细胞、成纤维细胞、滑膜细胞、神经胶质细胞)分泌产生,固定细胞产生的GRO进入血液系统,随着血液循环流通到血管中,所以血液中的GRO蛋白就包括单核细胞和那些固定细胞共同产生的,当固定细胞先产生GRO或者产生GRO的速率大于移动的单核细胞产生GRO的速率并能弥补移动细胞m RNA减少引起的GRO浓度降低时,时就会出现GRO蛋白升高的现象。m RNA降低的现象可能是因为食用橙子后相比实验前,移动细胞(单核细胞)中GRO的基因转录过程受到抑制;另外,内皮细胞表面的GRO和进入血液的GRO能影响到单核细胞、中性粒细胞粘附到血管内皮细胞处,致使血液中能移动的单核细胞比食用前减少了,我们测定的m RNA当然只是破碎单核细胞后所得的,所以这种粘附作用会使测得的m RNA浓度比食用前降低。细胞因子信号的传递是以体液系统尤其是血液循环系统为载体来实现免疫信号在全身的流通,但是现在很多研究药物作用的实验是通过体外培养细胞或解剖组织的方法去获得细胞因子表达的情况,因而会忽略固定细胞和移动细胞之间的信号交谈,所以我们提倡用血液/血清等作为研究素材去了解细胞之间的相互通讯关系。本研究的意义:本实验开拓创新,科学地证明了中国传统食品对人体的免疫系统有调节作用,食品对人体免疫系统的总体影响使得食品表现出相应的“性味”和归经,而且从细胞因子的产生和与其受体的作用途径去解释食品在胃肠粘膜的信号通路。另外实验发现,血液中测得的细胞因子是由血液中移动的免疫细胞和组织、器官中其他固定的非免疫细胞共同分泌并相互影响的结果。