168号放线菌发酵产物的分离提取和活性研究

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放线菌作为一种具有丰富药用价值的微生物类群,是最早发现的有生防效果的微生物,在生物防治中有很好的开发应用前景。本研究通过形态学和分子生物学鉴定,168号放线菌为小链霉菌,目前尚未发现能够产生抗植物病毒和抗肿瘤活性物质的该菌菌株。这为从小链霉菌发现和分离出新的抗病毒和抗肿瘤物质,提供了充分的依据和打下良好的基础。本研究对具有抗植物病毒活性的168号放线菌进行发酵条件的优化筛选,确定接种量为8%,200r/min时,28℃,培养6天,对TMV的钝化效果最好。并对发酵活性产物的活性特征进行抗病毒、抗肿瘤检测,发现该放线菌发酵产物对TMV、PVY、TuMV和CMV广谱性病毒有抑制作用。粗提液对TMV钝化率高达84.2%;对烟草和青椒上的TMV病毒病也有很好的预防和治疗效果;对CMV和PVY的增殖也有显著的抑制作用,抑制率高达74.5%和69.4%;通过对肿瘤细胞Hela-60和293-T抑制增殖的活性检测,抑制率分别为37.1%和28.3%。本文通过对168号放线菌发酵活性物质的薄层层析、SephadexG-75凝胶层析、硫酸铵梯度沉淀、超滤浓缩、SDS-PAGE电泳显示,成功的发现了活性物质为两个小分子蛋白,分子量大约为34KDa和22KDa,发酵原液中Ⅰ168和Ⅱ168蛋白浓度分别为0.018 ug/mL和0.25 ug/mL。对Ⅰ168和Ⅱ168的活性分别进行检测,发现2个组分都具有抗病毒和抗肿瘤作用。这些实验和数据为实现寻找新资源,研究放线菌的可持续应用,进一步挖掘放线菌资源潜力价值,提供基础数据。
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