目的： 寻找有助于早期诊断胃癌的分子标志物，进一步研究胃癌的多方面发病机制。 方法： 1、构建包含正常胃组织、肠化、异型增生、胃癌组织的组织芯片，用免疫组化技术研究多个分子标志物从正常-胃癌的变化趋势。 2、利用激光捕获显微切割(LCM)、聚合酶链反应及变性高效液相色谱(DHPLC)等方法进行胃癌及癌前病变的微卫星不稳定研究。 3，采用激光捕获显微切割分离胃癌组织及其切缘正常组织，检测胃癌线粒体突变及线粒体不稳定。 结果： 1、构建一包含胃癌及癌前病变的完整组织芯片，其中正常胃黏膜组织17例、肠化19例、异型增生33例、胃癌48例。组织芯片结构完整，每个点具有典型的组织形态。同时利用免疫组化染色对组织芯片的标本进行一组癌基因及抑癌基因(P53、P73、P27、MDM2、DPC4、FHIT)、凋亡及细胞周期信号转导相关基因(Survivin、PCNA、cyclinD1、COX-2、TGF-β RⅡ、VEGF)、黏附分子及错配修复基因(E-cadherin、β-catenin、ICAM-1、MSH2)等蛋白的表达，结果显示一部分基因从正常至癌变的发展过程中有一定的变化趋势(P＜0.05)。 2、肠化组织、异型增生、胃癌的微卫星不稳定(MSI)发生率分别为10.5％、21.12％、43.75％，从癌前到癌MSI逐步增加(P＜0.05)。解放军总医院军医进修学院博士论文 3、胃癌组织中线粒体的D一100p调控区D一loop(CA)n、电子传递链复合体I的NDI和NDS基因突变率分别为50.8%、39.3ry0和21.3%，相对应正常组织未检测到突变。61例胃癌组织中共检测出17个线粒体突变位点，其中n个位点为同义突变，6个位点为错义突变。mtDNA突变类型主要为碱基替代(76.5%，13/17)。有12例胃癌组织mtDNA同时存在2个位点的碱基突变。D一loop调控区514位点有29.5%(18/61)胃癌组织发生重复序列(CA)n的线粒体不稳定(mtMSI)，而且此18例中有8例(44.4%)同时存在高度核基因不稳定(nMSI一H)。结论: 1、组织芯片技术具有高通量、实验误差小、节约经费、省时、省力等优点，可大规模进行临床组织标本的检测，该技术为高通量筛查胃癌不同病变阶段基因表达的改变提供了有力的技术平台。 2、多基因变异的长期蓄积及协同作用在胃癌的多阶段发生发展过程中起着重要作用，为了解胃癌癌前高危病变的演进和胃癌的发病机理提供了依据。 3、胃癌的整个发生发展过程均与遗传学不稳定密切相关，从癌前到癌MS工逐步增加，表明在胃勃膜细胞MSI的早期参与和积累参加了胃癌的多步骤通路。MSI检测可充当胃癌危险性的标志物，通过确定癌前病变的MSI有助于辨认高危病人。 4、胃癌线粒体的D一loop调控区、NDI和NDS基因有较高的突变频率，提示线粒体突变参与胃癌的发生。胃癌mtDNA突变以点突变为主要特征且突变可能具有累积性。另外线粒体突变、线粒体不稳定及核基因组不稳定可能共同参与了胃癌的发生发展。 5、激光捕获显微切割技术保证样本的纯度和精确，有效地解决了异质性问题。变性高效液相色谱能高效、快速、准确检测微卫星不稳定及突变。