论文部分内容阅读
第一章首先对毛细管电泳的原理、检测方法作了介绍,又对单细胞电穿孔的基本原理、进展状况进行了简单介绍,并介绍了单细胞电穿孔装置的制作原理,毛细管电泳高通量单细胞进样、溶膜的基本原理及方法。重点对毛细管电泳电化学检测在单细胞高通量方面的分析以及应用进行了介绍。第二章采用毛细管电泳-电化学检测方法,以碳纤维簇微盘电极为工作电极,采用柱端检测池考察了缓冲溶液的浓度、缓冲液的pH值、分离电压、检测电势等实验参数对莱克多巴胺检测的影响,得到最佳检测条件为：缓冲液pH值为6.5浓度为50mmol·L-1的NaH2PO4-Na2HPO4缓冲液,分离电压为15kV,检测电势为1.2V。使用内径25μm,长45cm的毛细管,在10kV电渗进样10s的条件下,检测莱克多巴胺的线性范围为2.0×10-3-6.7×10-7mol·L-11,检测限可达6.7×10-7mo1.L-1(S/N=3)。并检测了含有莱克多巴胺的模拟肉肠样品,得到了良好结果。第三章本章研制了单细胞电穿孔仪,描述了单细胞电穿孔仪的应用优势及应用前景。介绍了单细胞电穿孔的概念,产生机理,影响单细胞电穿孔的多种因素及该现象产生的前提条件。自制的细胞穿孔装置主要由充电部分和放电部分组成,充电部分包括220V的交流电源、接触调压器、整流器、两个15μF的滤波电容、两个陶瓷电阻以及一个的电解质电容(它同时也是放电部分的电源)。放电部分包括电解质电容和电穿孔室。电穿孔室主要由两根互相平行的铂片组成,铂片宽1mm,长9mm,厚约2001μm,两铂片间的间距为1mm。应用研制的单细胞电穿孔仪分别分析了脉冲电压、脉冲次数、放电电容等变量对不同细胞电穿孔率的影响,并测得了人血血红细胞、人血淋巴细胞、大白鼠腹腔肥大细胞的最佳穿孔条件分别为脉冲电压60V、100V、90V,脉冲次数35次、60次、40次,放电电容10uF、10uF、10uF。结果表明,在以上条件下三种细胞能达到较高的电穿孔率,展示了该方法与毛细管电泳电化学联用在单细胞分析方面具有广阔的应用前景。第四章本章制作了一种可以实现单细胞连续进样并能够进行细胞溶膜的高通量进样装置。主要研究了进样压力和细胞浓度对检测结果的影响。确定了利用毛细管电泳电化学检测方法进行单细胞高通量分析的最佳条件。使用自制的高通量细胞溶膜进样装置,通过改变进样注射器活塞外加推力的大小来改变进样压力,从而改变细胞进样速度。同时配制合适的细胞悬浮液,通过协调各项条件,让细胞匀速、均匀的通过进样毛细管,在电化学检测池进行电化学检测,得到了良好的结果,实现了单细胞的快速检测。