侧流免疫层析(LFIA)是体外诊断实验的一种,因为其快速、方便、稳定、低成本,并且易于读取结果的优势而被广泛使用。其中,以球型金纳米颗粒的应用最为广泛。然而,基于常规的球形金纳米颗粒的检测方法灵敏度不足,这阻碍了侧流免疫层析试纸的进一步应用。时间分辨荧光分析法(Time resolved Fluoroimmunoassay,TRFIA)是最近十几年发展起来的非同位素免疫分析技术,也是目前最灵敏的微量分析技术。TRFIA使用镧系元素标记抗原或抗体,根据镧系元素螯合物的发光特点,用时间分辨技术测量荧光,同时检测波长和时间两个参数进行信号分辨,可有效地排除非特异荧光的干扰。为了提高侧流免疫层析方法的灵敏度,实现高灵敏度检测叶酸含量,通过将时间分辨荧光与侧流免疫层析方法相结合,开发了一种可用于叶酸定量检测的时间分辨荧光侧流免疫层析方法,本文的主要研究结果如下:以苯乙烯为原料,采用无皂乳液聚合法,以过硫酸铵为引发剂调节微球合成,使用甲基丙烯酸甲酯和甲基丙烯酸钠作为共聚单体,通过改变染料合成了不同颜色、粒径均一、分散性良好的聚苯乙烯微球。使用场发射扫描电子显微镜、紫外光谱仪和粒度分析仪对乳胶微球的微观结构、形貌,光学性能和粒径分布等数据进行了表征;对微球的标记条件进行了摸索,基于标记链球菌蛋白G的两种不同颜色聚苯乙烯微球构建了布鲁氏菌病侧流免疫层析试纸,可用于布鲁氏菌病抗体的定性检测。该免疫层析试纸的定性检测下限为40 IU/ml,能够在10分钟内在试纸条上检测出阳性样品并显示结果。对布鲁氏菌病侧流免疫层析试纸进行了灵敏度、特异性、稳定性和可重复性实验评估,并与常规球型金纳米粒侧流免疫层析试纸的检测效果进行了比较,这种基于微球的条带为布氏杆菌病的现场检测和其他传统的生物学检测方法相比,实现了对布鲁氏菌病的高灵敏度、快速定性检测,同时也奠定了时间分辨荧光羧基聚苯乙烯微球的制备和应用基础。以苯乙烯为原料,采用分散聚合方法制备了时间分辨荧光羧基聚苯乙烯微球,使用场发射扫描电子显微镜、紫外光谱仪、粒度分析仪、傅里叶变换红外吸收光谱仪和荧光光谱仪对时间分辨微球的微观结构、形貌,红外光谱、荧光强度、量子产率、荧光寿命、粒径分布和表面基团等数据进行了表征;建立了时间分辨荧光微球的荧光强度与浓度关系曲线,对时间分辨荧光羧基聚苯乙烯微球的标记条件进行了摸索,并使用时间分辨荧光羧基聚苯乙烯微球为标记材料,标记叶酸单克隆抗体,开发了一种时间分辨荧光的侧流免疫层析方法,可用于叶酸的定量检测。对叶酸免疫层析试纸进行了灵敏度、特异性、稳定性和可重复性实验评估,通过灵敏度曲线拟合确定其LOD值为0.78 ng/ml,检测结果能够在10分钟内稳定并读取。与常规叶酸检测方法经行比较,时间分辨荧光侧流免疫层析方法实现了对叶酸分子的快速、灵敏、定量检测。本文所合成的普通聚苯乙烯乳胶微球和时间分辨聚苯乙烯乳胶微球因其表面具有羧基基团,均可以标记一种或多种蛋白或核酸探针等标志物,在生物应用领域具有广阔的应用前景。此外,本文构建的叶酸侧流免疫层析试纸具有较高的灵敏度,可用于叶酸的快速定量检验。