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本研究主要以TLR4(Toll-like receptor4)转基因羊为模型,从生殖生理角度进行了系统的安全评价,旨为解释转基因是否具有生物安全性提供部分理论依据,这将有助于今后对提高转基因动物的认识和对转基因生物技术的公共认知。实验采用本实验室生产的F0和F1代TLR4转基因羊为实验动物,分别从血液学、组织病理学、繁殖学、表观遗传学等方面进行监测或检测。经Southern blot鉴定,共获得5只FO和7只F1代TLR4阳性后代。局部炎症实验表明转基因绵羊能快速启动炎症反应。免疫荧光染色的结果显示TLR4表达于卵母细胞质膜上,且表达量高于对照组。血液生理生化指标、繁殖性状各项指标的检测结果显示：转基因羊与非转基因羊相比较,血液生理和生化指标均无显著性差异。同样,在初情期、发情周期、发情持续时间、超数排卵效果、总受胎率以及妊娠周期的基本繁殖参数也无显著性差异。在此基础上,实验进一步检测了转基因对卵母细胞DNA甲基化的影响。本实验分为两部分：(1)注射pTLR4-3s和Elution Buffe组在1、2、4细胞期胚胎甲基化水平显著高于对照组(P<0.05),但8细胞和囊胚阶段与对照组间无显著性差异(P>0.05)；(2)免疫荧光染色的结果显示,转基因羊的GV、GVBD、MI、Mil卵母细胞甲基化水平和对照组间无显著差异(P>0.05)。同样,转基因对羊耳成纤维细胞甲基化水平也无显著影响(P>0.05)。流式细胞仪分析公羊精子结构的结果显示,在F0和F1代,转基因组与非转基因组间精子活力(85.63%vs.85.90%和85.61%vs.84.38%)、质膜完整精子比例(82.23%vs.87.33%和85.00%vs.82.71%)、线粒体高膜电位精子比例(85.58%vs.83.27%和86.61%vs.83.53%)均无显著性差异(P>0.05)。计算机辅助分析仪检测结果显示,转基因对精子运动性无显著性影响(P>0.05)。人工受精结果显示,转基因羊的妊娠率(66.67%)与非转基因羊(66.33%)无显著性差异。综上所述,转TLR4基因对雌性绵羊血液生理生化指标、繁殖性状的各项指标无显著影响；转TLR4基因对羊各阶段卵母细胞及耳成纤维细胞DNA甲基化水平无显著性影响；转TLR4基因不影响公羊的精子质量。