脱脂米糠联产植酸和蛋白酶解物研究

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本论文研究了脱脂米糠的综合利用。脱脂米糠提取植酸后利用蛋白酶酶解米糠中的蛋白质获得米糠蛋白酶解物(RBPH),同时研究了植酸的纯化、RBPH的精制和功能性质。首先采用酸浸法得到植酸提取液,综合考虑植酸提取率和蛋白损失率,利用Box-Benhnken中心组合试验和响应面分析,确定了植酸的最佳提取条件:pH3.9,液料比9︰1,提取时间4.4 h,提取温度50℃。在该工艺条件下植酸提取率达85.83%,蛋白质损失率为10.67%。利用碱沉淀法和D318型弱碱性阴离子交换树脂吸附洗脱分离纯化植酸。首先选择Ca(OH)2-氨水两步沉淀法沉淀植酸,沉淀pH 9.0。其次,使用D318型弱碱性阴离子交换树脂对植酸分离纯化,吸附洗脱条件分别为:吸附液pH2.5,流速1.0 mL/min、浓度10 mg/mL,NaOH洗脱液流速1.0 mL/min、浓度1.5 mol/L。在此条件下,植酸回收率达96%。最终植酸提取率为79.20%,纯度为94.72%。利用碱性蛋白酶和复合蛋白酶双酶分步酶解制备RBPH。利用Box-Benhnken中心组合试验和响应面分析,得出了制备RBPH的最佳工艺条件:碱性蛋白酶酶解条件pH9.0,温度60℃,酶添加量4000 NPU/g,时间1.8 h;复合蛋白酶酶解条件pH7.5,温度45℃,酶添加量3200 NPU/g,时间2 h。经双酶分步酶解提取,米糠中蛋白质提取率为79.12%,RBPH纯度为34.51%,水解度为23.34%。采用50 KDa超滤膜除去RBPH中的大分子杂质,并利用DA201-C大孔吸附树脂对RBPH进行分离纯化。确定了RBPH吸附洗脱的工艺条件:吸附液pH4.5,吸附流速0.5 mL/min,解吸流速1.0 mL/min。以不同浓度乙醇进行分级洗脱,得到了具有不同氨基酸组成和疏水值的RBPH(RBPH-25,RBPH-50,RBPH-75,RBPH-100),RBPH回收率为96.43%。RBPH的纯度从粗提物的34.51%升至60%~78%,RBPH得到了富集。同时,经精制后米糠中蛋白质最终提取率为66.42%。实验表明,RBPH各组分具有良好的乳化活性,并具有很强的抗氧化性和较好的降胆固醇活性。与大豆分离蛋白(SPI)相比,RBPH具有较好的乳化性,而且乳化稳定性较强,且25%组分在弱酸性和中性条件下具有最好的乳化性。而75%乙醇洗脱组分(RBPH-75)具有最高的抗氧化活性;RBPH各组分具有很强的DPPH自由基清除能力、抑制亚油酸自动氧化能力和还原能力,但螯合铁离子能力较差,在浓度为4 mg/mL时,螯合铁离子能力最高为20.38%。同时,对RBPH降胆固醇活性研究发现,RBPH具有一定的降胆固醇性质,其中RBPH-50和RBPH-75具有较高的降胆固醇活性,在10mg/mL时对胆固醇溶解抑制率最高可达48.53%。
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