中药作为中华文化的瑰宝,在人类的健康繁衍中扮演着重要角色。但由于中药组分复杂、活性组分不明、缺少可靠的毒理、药理研究数据,阻碍了中药步入现代化的进程,因此,探求中药中含有的活性组分已成为整个医药研究的焦点。长期以来,众多中药被广泛用于女性疾病和女性保健的治疗,这类中药中含有的植物雌激素效应不容忽视。肉苁蓉享有“沙漠人参”之美称,被视为滋补、强壮的名贵中药。本课题通过整体动物实验(小鼠子宫增重法)及体外细胞增殖实验筛选肉苁蓉植物雌激素拮抗作用的药效部位,利用HPLC技术手段考察不同处理方法对大鼠含药血清、尿液、粪便的影响,建立肉苁蓉拮抗活性组分在血、尿、粪中的HPLC图谱。采用质谱技术对肉苁蓉体内外各种生物样品进行鉴别及结构解析,对从中药中发现植物雌激素拮抗活性的新药源,临床疾病的应用有重大意义。主要研究成果如下:(1)采用整体动物实验(小鼠子宫增重法),观察用药前后动物子宮系数变化;采用MTT法评价受试动物含药血清对MCF-7细胞增殖情况的影响。结果表明:肉苁蓉95%醇提部位40g·kg-1·d-1剂量组,能显著拮抗阳性药物引起的子宫增长(P<0.01),其含药血清可显著拮抗MCF-7细胞增殖(P<0.01),是本实验筛选出的最佳活性部位及给药剂量。(2)采用HPLC-Q-TOF/MS联合技术,肉苁蓉药材的HPLC图谱共标识了26个主要色谱峰,利用标准品和质谱信息,鉴定出24个成分:Kankanoside H1、松果菊苷、肉苁蓉苷F、肉苁蓉苷B、管花苷A、肉苁蓉苷C、Osmanthuside B、毛蕊花糖苷、顺毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、管花肉苁蓉苷B1、肉苁蓉苷D、Campneoside Ⅰ、管花苷B、Campneoside Ⅱ、2’-乙酰基毛蕊花糖苷、肉苁蓉苷G、Kankanoside E。(3)采用HPLC-Q-TOF/MS联合技术,肉苁蓉拮抗剂量下的血清HPLC图谱共标识了12个主要色谱峰,利用标准品和质谱信息,鉴定出其中6个原型成分:京尼平苷酸、松果菊苷、毛蕊花糖苷、肉苁蓉苷D、肉苁蓉苷A、红景天苷;6个代谢成分:3,4-二羟基苯乙醇苷、3,4-二羟基苯乙醇、肉苁蓉苷B葡萄糖苷酸结合物、甲基化3,4-二羟基苯乙醇苷、3,4-二羟基苯乙醇硫酸结合物、毛蕊花糖苷硫酸结合物。(4)采用HPLC-Q-TOF/MS联合技术,肉苁蓉拮抗剂量下的尿液HPLC图谱共标识了15个主要色谱峰,利用标准品和质谱信息,鉴定出7个原型成分:京尼平苷酸、红景天苷、丁香苷A3’-α-L-吡喃鼠李糖苷、松果菊苷、毛蕊花糖苷,2’-乙酰基毛蕊花糖苷、Kankanoside H1;8个代谢成分:肉苁蓉苷G硫酸结合物、甲基化8-表马钱子酸、羟甲基3,4-二羟基苯乙醇苷、香草醇葡萄糖苷酸结合物、甲基化咖啡酸硫酸结合物、红景天苷甘氨酸代谢物、羟基酪醇葡萄糖苷酸结合物、咖啡酸葡萄糖苷酸结合物。(5)采用HPLC-Q-TOF/MS联合技术,肉苁蓉拮抗剂量下的粪便HPLC图谱共标识了15个主要色谱峰,利用标准品和质谱信息,鉴定出7个原型成分:肉苁蓉苷D、红景天苷、去咖啡酰基毛蕊花糖苷、肉苁蓉苷G、管花苷A、松果菊苷、毛蕊花糖苷,8个代谢成分:3,4-二羟基苯乙醇、肉苁蓉苷B硫酸结合物、黄大花洋地黄苷、乙酰化肉苁蓉苷F、乙酰化肉苁蓉苷D、甲基化8-表马钱子酸、咖啡酸、羟甲基3,4-二羟基苯乙醇苷。本实验比较全面的阐明了肉苁蓉发挥植物雌激素拮抗作用的物质基础,揭示了 95%醇提部位40g·kg-1·d-1剂量组为其有效部位,利用HPLC-Q-TOF/MS联合技术对肉苁蓉拮抗剂量下入血、尿、粪的化学组成进行分析及鉴定,为肉苁蓉化学组分的深入研究奠定基础。