【摘 要】
:
miRNA是一类短的、非编码的、单链RNA分子,多数miRNA在各类恶性肿瘤细胞或组织中均表达。根据环境或下游靶标的不同,充当不同的角色,从而参与肿瘤的发生以及癌细胞的分化过程。生长停滞基因GADD45a,在细胞周期发生阻滞、凋亡、DNA修复损伤以及DNA甲基化等发挥着相当重要的作用。研究表明miR-152-3p在乳腺癌、慢性白血病、胶质母细胞瘤等肿瘤中行使不同的功能,但关于rno-miR-152
论文部分内容阅读
miRNA是一类短的、非编码的、单链RNA分子,多数miRNA在各类恶性肿瘤细胞或组织中均表达。根据环境或下游靶标的不同,充当不同的角色,从而参与肿瘤的发生以及癌细胞的分化过程。生长停滞基因GADD45a,在细胞周期发生阻滞、凋亡、DNA修复损伤以及DNA甲基化等发挥着相当重要的作用。研究表明miR-152-3p在乳腺癌、慢性白血病、胶质母细胞瘤等肿瘤中行使不同的功能,但关于rno-miR-152-3p在肝脏中的调控作用鲜有报道。使用生物信息学软件Target Scan、IPA、miRBase等预测发现,miR-152-3p与GADD45a之间可能存在靶向关系。为了验证miR-152-3p靶向GADD45a调控肝癌细胞增殖和凋亡的作用机制,本文以大鼠肝癌细胞CBRH-7919作为研究对象,通过分子生物学和生物化学的技术来探究miR-152-3p与GADD45a的靶向关系、两者在肝癌细胞中如何发挥作用等问题。取得的主要研究结果如下:(1)RT-q PCR检测转染miRNA转入细胞的表达情况。通过转染miR-152-3p mimic、miR-inhibitor、miR-NC到CBRH-7919细胞,人为干预miRNA的表达,RT-PCR检测发现细胞中的miRNA表达量存在显著差异,确定miR-152-3p转入成功。(2)CCK8、Ed U和流式细胞术检测miRNA对细胞增殖、周期及凋亡的影响。通过MTT、Ed U等实验检测rno-miR-152-3p水平的变化对CBRH-7919细胞的活力、细胞增殖能力具有较大的影响,过表达rno-miR-152-3p能够显著降低细胞的活力,抑制细胞的增殖并促进凋亡的发生。(3)采用划痕实验、流式细胞术等检测细胞迁移、凋亡情况。划痕实验发现过表达miR-152-3p细胞在24 h后的迁移范围小于NC组;利用PI和Annexin V-FITC双染料处理细胞,流式细胞仪对细胞进行凋亡检测,发现过表达miR-152-3p后,细胞凋亡的数量相对增加,反之,细胞凋亡数量降低。(4)Western Blot检测与凋亡或增殖相关的蛋白表达量。通过Western Blot的方法检测增殖相关蛋白p-Akt和凋亡相关蛋白CASPASE3、CASPASE9、BAX等蛋白在不同组miRNA的表达量,结果发现过表达miR-152-3p组能够抑制增殖相关蛋白的表达,促进凋亡基因高表达;p21蛋白也有所改变,推测miR-152-3p参与p53信号通路的调控。(5)Luc报告基因实验确定了rno-miR-152-3p与GADD45a是靶向关系。通过把GADD45a 3’UTR野生型/突变型序列构建到PGL3-CMV-LUC-MCS载体上,经质粒转化、提取、鉴定;将质粒及miRNA mimic/NC转染到细胞中培养48 h收材,双荧光素酶实验检测海肾荧光素和萤火虫荧光素的RLU值的比值变化,确定野生型GADD45a3’UTR组中mimic与NC间存在差异,而突变型组无差别;说明miR-152-3p可以靶向GADD45a。(6)miR-152-3p靶向GADD45a调控肝癌细胞的发生。通过共转染实验,即转染miR-inhibitor构建一个短暂的miR-152-3p低表达细胞系,并对GADD45a进行干涉,发现miR-152-3p在CBRH-7919细胞中的抗增殖、促凋亡的能力受GADD45a的限制;CCK8、Ed U、流式细胞术等实验说明干涉GADD45a组与NC组相比,细胞活力、增殖能力均有所提高,该情况说明miR-152-3p靶向GADD45a共同参与调控CBRH-7919细胞的分化、生长。综合而言,本研究证实了miR-152-3p靶向GADD45a在肝癌细胞CBRH-7919中发挥抑制增殖、促凋亡的作用;这项研究可能为治疗肝脏疾病提供一个新的靶点。
其他文献
随城市化、工业化发展及工业布局调整,城市工业厂房搬迁已成为发展趋势,而工业废弃场地污染严重。本研究以湖北省黄石东钢厂搬迁遗留场地为例,通过采样、分析检测场地土壤污染水平,评估场地污染类型,并从污染土壤中筛选高效降解微生物,进而进行污染土壤修复工程措施,制定一套经济可行的修复方案。本结果可为类似的多环芳烃场地污染的微生物修复方案提供数据支撑和技术支持。主要结论如下:(1)评估了湖北省黄石市东钢厂废弃
乙型肝炎是由乙型肝炎病毒引起的传染性疾病,在我国和世界各国均有流行。1964年首先在澳洲土著人血清中发现澳大利亚抗原,后确认是乙型肝炎病毒表面抗原(HBs Ag)。随着乙型肝炎病毒的发现,对乙型肝炎的病因、病原、流行病学、预防、诊断和治疗都有了进一步的认识。HBs Ag由七条多肽带组成,其中23KD和28KD为HBs Ag主带,占70%以上。化学分析法测知含蛋白质70%,糖5%,脂类25%,但脂类
结直肠癌是消化系统最常见的恶性肿瘤之一,是全球癌症第二大致死原因。化疗、放化疗和靶向治疗是目前结直肠癌的标准治疗方法。虽然不断尝试新的药物联合使用后反应率有所提高,但是由于普遍耐药性造成晚期结直肠癌的五年生存率低于20%。目前临床上主要使用经验性临床风险分层为患者选择治疗方案,但是同一分期的不同患者对同一治疗方案有不同的反应。大多数研究都是基于不同治疗的患者的单一分子数据,无法捕捉肿瘤生态系统复杂
随着城镇化进程的加快,人们生活水平逐渐提高,生活污水的排放量日渐增加。生活污水中氮污染对生态环境和人体健康造成巨大的威胁。微生物强化污水处理是一种高效的污水脱氮技术。高效脱氮降解菌可同时实现对污水中有机物和氮的去除,近年来已经成为水环境领域研究的热点。然而,近年来随着家庭清洗剂和洗衣化学品的广泛使用,导致生活污水中阴离子表面活性剂的含量逐渐增加。直链烷基苯磺酸钠(Linear alkybenzen
湖岸带介于陆地生态系统和水生态系统之间,能够减缓陆地系统物质输入水体,是控制湖水水质最直接有效的天然屏障。土壤的空间异质性以及植被覆盖的不同都会影响湖岸带土壤的硝化和反硝化过程,但土壤理化性质的空间特征及交互作用对湖岸带土壤中氮的转化影响尚不清楚。针对该问题,本研究在野芷湖岸草本和乔木植物覆盖区选择采样点采集土壤样品,进一步开展不同深度土壤样品的硝化和反硝化潜势培养试验。分析不同样品基础理化性质、
增加种植密度是提高玉米产量的主要方式,但密度增加会给群体构建带来不利的影响,因此利用喷施化学调控剂来塑造合理的玉米株型,增加其通风透光,构建理想的玉米群体结构是保证其高产稳产的一项重要栽培手段。本研究通过喷施不同种类化控调控剂,调查其对不同种植密度下冠层结构及功能的影响,分析玉米个体与群体对化学调控的响应与适应机制,揭示不同化学调控下构建合理冠层的机制,为化学调控提高玉米产量提供理论支持。本试验以
铝(Al)元素是土壤中含量最多的金属元素。在p H<5.0的酸性土壤中,植物毒性形式的Al3+会出现。铝毒害已成为酸性土壤地区阻碍植物生长和农作物产量的主要逆境因素。遭受铝毒害的植物表现最早和最明显的症状是根伸长受到抑制。植物也进化出了一些抗铝毒的机制,如根系分泌有机酸螯合毒性Al3+、增强抗氧化系统的活性以及改变细胞壁结合铝的能力等。目前,有大量报道表明无机元素硅(Si)在植物逆境胁迫适应中发挥
不同环境条件下污染物迁移转化规律的研究是制定精准的环境风险管理和环境决策的科学基础和重要依据。汞是一种持久性有毒污染物,在环境中以多种形式存在,其中甲基汞因其生物富集特性和生物毒性而备受关注。食用鱼类等水产品是人体暴露甲基汞的主要途径之一,多个国际组织及国家对于鱼类等水产品甲基汞限量均有严格要求。然而,不同环境条件下汞的迁移转化规律存在较大差异,因此探究鱼体富集甲基汞的地域差异及其机制有助于有效评
NADPH氧化酶(NADPH oxidases,NOXs)是细胞内一组专职产生活性氧(Reactive oxygen species,ROS)的多酶复合物。ROS包括O2-、H2O2和NO,易在细胞质基质和线粒体内膜中转变成氧自由基。当有病原体入侵细胞时,中性粒细胞可以通过呼吸爆发在短时间内快速而高效的产生大量的氧自由基,杀灭病原微生物,构成免疫细胞的非特异性免疫的第一道防线。此外,ROS对体内的
塑料制品被广泛运用于农业地膜领域,我国的棚膜覆盖率已经远远超过世界其余国家。地膜在空气中经风化,磨损和紫外线照射等会形成“微塑料”颗粒进入到土壤环境,破坏土壤结构,对土壤生态系统产生一系列不良影响,因其难以降解,微塑料污染现已引起了科研工作者的关注。秸秆还田作为一种新型培肥方式,现已被广泛运用与农田生产中。微塑料以及秸秆进入土壤后会对土壤碳氮循环产生一定的影响。本研究探究微塑料和秸秆输入对不同土壤