过表达UCHL1-AS1及联合雷帕霉素对肝癌细胞增殖的影响及相关生物信息学分析

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目的:用慢病毒转染人肝癌细胞株Bel-7404研究过表达UCHL1-AS1对肝癌细胞株增殖、迁移能力的影响,以及用过表达UCHL1-AS1与雷帕霉素联合处理对肝癌细胞增殖的影响,并用生物信息学分析方法分析联合用药的可能机制。方法:1.用慢病毒转染人肝癌细胞株Bel-7404,建立过表达UCHL1-AS1稳转株,其转染效率用荧光显微镜及qRT-PCR方法检测。2.用MTT实验检测过表达UCHL1-AS1的肝癌细胞增殖能力,用划痕实验检测细胞迁移能力。3.设置control组(空白对照组)、NC组(阴性对照组)、UCHL1-AS1组(实验组)、雷帕霉素+control组、雷帕霉素+NC组、雷帕霉素+UCHL1-AS1组。不同浓度雷帕霉素(0 nmol/L、10 nmol/L、20 nmol/L、40 nmol/L、80nmol/L、100 nmol/L、200nmol/L、500nmol/L、1000 nmol/L)单独处理组,处理细胞48h后用MTT方法检测雷帕霉素对过表达UCHL1-AS1所致Bel-7404细胞增殖的抑制作用。4.基于TCGA数据库,分析369名HCC患者的UCHL1-AS1和UCHL1表达的相关性,及其与mTOR通路上mTORC1下游各基因靶点之间的相关性。结果:1.UCHL1-AS1组转染细胞的UCHL1-AS1表达明显高于control组和NC组(both P<0.05),故稳转株可用于后续实验。2.未见UCHL1-AS1组与control组和NC组细胞的生长速率有差异性(P>0.05)。3.与control和NC组比较,UCHL1-AS1组细胞的迁移能力明显受到抑制(P<0.05)。4.过表达UCHL1-AS1联合雷帕霉素作用细胞48h后,在200nmol/L和500nmol/L雷帕霉素联合UCHL1-AS1处理组与control组和NC组的抑制率存在明显的差异性(P<0.01)。5.基于TCGA数据库分析提示,UCHL1的表达与EIF4EBP1、ATG13、PTPA的表达水平均呈正相关(P<0.05)。UCHL1-AS1与UCHL1的表达水平呈正相关(P<0.05)。结论:1.未见过表达UCHL1-AS1对Bel-7404肝癌细胞增殖的明显影响,其细胞的迁移受到抑制。2.过表达UCHL1-AS1与雷帕霉素联合作用对人肝癌细胞Bel-7404的增殖有明显的抑制作用,且此作用强于过表达UCHL1-AS1、雷帕霉素单独对细胞的作用。3.过表达UCHL1-AS1与雷帕霉素对Bel-7404肝癌细胞增殖的联合作用机制可能与EIF4EBP1、ATG13和PTPA有关。
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