背景:Rab7是Rab家族中重要一员,与自噬、内吞、细胞凋亡、肿瘤抑制等有着很紧密的关系,但与肾纤维化关系的研究较少。本组前期研究了缺氧肾小管上皮细胞自噬和内吞对细胞外基质产生和降解的影响,发现Rab7在其中发挥了重要作用,由于体外细胞培养与体内环境不同,所以迫切需要了解整体水平的情况。目的:通过构建Rab7基因敲入鼠和肾纤维化模型,检测不同时间点肾组织内Rab7基因表达和自噬及纤维化相关指标,比较野生型和过表达Rab7基因小鼠间的差别,揭示Rab7基因在肾纤维化发展过程中的变化规律和可能发挥的作用。方法:应用crispr/cas9基因编辑技术,将gRNA定点引入到C57/B6小鼠的ROSA26位点,把包含小鼠Rab7的cDNA的质粒载体和cas9一同通过显微注射到小鼠原核时期的受精卵中,培育出Rab7基因敲入鼠,然后进行鉴定;再将其和野生型C57BL/6小鼠一起作单侧输尿管结扎手术(UUO),建立肾纤维化模型。在UUO术后一周末和两周末,分别处死动物,取肾组织,制作石蜡切片或提取蛋白质,采用HE染色、Masson染色、免疫组化和Western Blot等方法比较野生型小鼠、Rab7基因敲入鼠在Rab7基因表达、自噬活性和肾纤维化程度等方面的差别。结果:基因敲入鼠Rab7核酸水平显著高于野生型小鼠,心、肝、脾、肺、肾等组织Rab7蛋白表达亦相应升高,提示成功建立Rab7基因敲入鼠。同时发现,单侧输尿管结扎手术后,野生型小鼠模型体内Rab7表达不断增高,两组小鼠模型的自噬活性不断增强,并且Rab7基因敲入鼠模型的自噬活性要比同一时间节点的野生型者高;UUO术后一周时Rab7基因敲入鼠模型肾纤维化程度要比野生型者轻,而在术后在两周时反而比野生型者重。结论:(1)成功建立Rab7基因敲入鼠。(2)Rab7高表达在UUO小鼠肾纤维化早期起抑制作用,随着自噬不断被激活,最终反而会加重纤维化。