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目的:通过观察盐酸小檗碱对白念珠菌β-葡聚糖刺激下巨噬细胞TLR4/NF-κB信号通路及其调控的NLRP3炎症小体的作用,探讨盐酸小檗碱对白念珠菌感染固有免疫的调控机制;同时观察盐酸小檗碱对菌丝相白念珠菌细胞壁完整性的影响。方法:在采用丙二醇甲醚醋酸酯(Propylene glycol methyl ether acetate,PMA)(100ng/ml)处理人单核细胞白血病细胞(THP-1)后,依据细胞形态学和流式细胞术鉴定和分析PMA诱导产生的巨噬细胞形态和生物学特性。采用CCK-8法检测盐酸小檗碱对诱导产生的巨噬细胞的细胞毒性,确定其合理的浓度范围。采用不用剂量的白念珠菌感染巨噬细胞,确定合适的感染剂量,通过倒置显微镜观察白念珠菌不同感染剂量对巨噬细胞形态的影响。在采用合适剂量的盐酸小檗碱处理白念珠菌感染的巨噬细胞后,通过ELISA检测IL-1β、IL-18表达水平和Western Blot检测TLR4、My D88、NF-κB、NLRP3、ASC、Pro-caspase1、Cleaved Caspase1蛋白的表达。微量液基稀释法检测MIC;spot assay检测盐酸小檗碱对白念珠菌SC5314菌落形成的影响;XTT实验和荧光染色检测盐酸小檗碱对白念珠菌SC5314菌丝活力的影响;扫描电镜分析盐酸小檗碱对白念珠菌SC5314菌丝形态的影响;透射电镜观察盐酸小檗碱干预后白念珠菌SC5314菌丝细胞壁的变化;流式细胞术检测盐酸小檗碱对白念珠菌SC5314菌丝细胞壁β-葡聚糖的影响;q RT-PCR检测盐酸小檗碱对白念珠菌丝特异性基因及白念珠菌β-葡聚糖合酶调控基因表达的影响。结果:形态学鉴定和流式细胞术分析表明,PMA可有效地诱导单核细胞分化为巨噬细胞。通过CCK8实验,我们确定盐酸小檗碱对巨噬细胞较合适的浓度区间为4-16μg/ml,并以16μg/ml作为后续研究中的药物干预剂量。白念珠菌最合适感染剂量为1.5×10~6CFU/ml。进一步分析表明,白念珠菌感染可显著地诱导巨噬细胞TLR4/NF-κB及NLRP3炎症小体通路中相关炎症因子IL-1β、IL-18及TLR4、NF-κB、NLRP3、Cleaved Caspase1表达增加,而当采用16μg/ml的盐酸小檗碱干预后,这些炎症因子的表达则显著地下降。但值得注意的是,盐酸小檗碱并未诱导白念珠菌感染后巨噬细胞中My D88、ASC、Pro-caspase1等分子明显的改变。盐酸小檗碱对白念珠菌临床株及标准株均显示了较好的抑菌效果,MIC为64-128μg/ml。spot assay、XTT和荧光染色结果表明随着盐酸小檗碱浓度的增加,白念珠菌标准株的活力则逐渐降低。透射电镜检测结果也表明盐酸小檗碱可致白念珠菌细胞壁损伤。流式细胞术分析显示,当盐酸小檗碱浓度增加时,β-葡聚糖荧光强度则逐渐增强。q RT-PCR结果进一步表明,盐酸小檗碱可显著下调菌丝特异性基因以及与β-葡聚糖合酶调控基因。结论:盐酸小檗碱可下调NLRP3炎症小体的表达,并且与TLR4/NF-κB通路相关。盐酸小檗碱可下调白念珠菌β-葡聚糖合成酶相关基因,并使β-葡聚糖暴露,破坏白念珠菌细胞壁的结构,影响其细胞壁的完整性。