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第一部分单细胞RT-PCR方法的建立及烟碱型乙酰胆碱受体α9亚基在大鼠单个Ⅱ型前庭毛细胞中的表达目的:乙酰胆碱(Ach)是脊椎动物外周前庭系统最主要的传出神经递质,并且烟碱型乙酰胆碱受体α9亚基(nAChR)被认为是介导外周前庭系统中胆碱能传出信号的主要受体之一。研究表明人类与其他哺乳类动物(包括大鼠)的乙酰胆碱能传出神经纤维支配模式相近,而人类与鸟类之间乙酰胆碱能传出神经纤维支配模式间有许多差别。因此以大鼠为研究对象可以帮助了解人类单个前庭毛细胞的神经纤维支配模式及信号转导方式,进而为前庭疾病的病理机制阐明及前庭疾病的治疗提供理论基础。本研究目的为建立单细胞RT-PCR方法及检测α9 nAChR在大鼠单个Ⅱ型前庭毛细胞中的表达。方法:用RT-PCR方法检测α9 nAChR在大鼠前庭终器中的表达;建立单细胞RT-PCR方法并用单细胞RT-PCR方法检测α9 nAChR在大鼠单个Ⅱ型前庭毛细胞中的表达。结果:在大鼠前庭终器及大鼠单个Ⅱ型前庭毛细胞中均可检测到编码α9nAChR基因的mRNA表达,并经直接测序证实其与预计扩增的cDNA序列一致。结论:此研究成功地建立了单细胞RT-PCR方法,其可以有效地检测在单个前庭毛细胞中某种mRNA特异性的表达。研究结果证实α9 nAChR在大鼠单个Ⅱ型前庭毛细胞中有表达,并进一步表明α9 nAChR是介导外周前庭系统中胆碱能传出信号的主要受体之一。第二部分γ-氨基丁酸B型受体GB1亚基在大鼠前庭终器的表达目的:检测大鼠前庭终器中γ-氨基丁酸B型受体(GABAB受体)GB1亚基的表达,探讨GABAB受体在大鼠前庭终器的分布。方法:根据GeneBank公布的大鼠GABAB受体GB1亚基的mRNA序列设计跨内含子的特异性引物,运用RT-PCR方法检测大鼠前庭终器中编码GABAB受体GB1亚基的mRNA的表达,对PCR产物测序确认。结果:扩增出标志GABAB受体GB1亚基表达的PCR产物,并经测序证实与预期扩增部位cDNA序列一致。结论:在大鼠前庭终器组织中有GABAB受体GB1亚基的表达。提示GABAB受体可能介导前庭外周系统GABA能信号的转导。第三部分GABAB受体在大鼠单个Ⅰ型前庭毛细胞中的表达及功能目的:GABA是大鼠外周前庭系统的传出神经递质之一。通常认为哺乳类动物Ⅰ型前庭毛细胞(VHCsⅠ)为传入神经盏完全包裹而没有传出神经末梢直接支配。但1991年Wackym et al.报道CGRP免疫阳性传出神经末稍偶尔会穿过包绕大鼠VHCsⅠ的传入神经盏与某些大鼠VHCsⅠ直接接触。目前尚无关于GABA能传出神经末稍是否直接支配大鼠VHCsⅠ的研究。本研究目的为探讨GABAB受体在大鼠VHCsⅠ中表达及其电生理特性,提出并证明GABA能传出神经末稍可能直接支配某些大鼠VHCsⅠ的假说。方法:运用单细胞RT-PCR方法检测GABAB受体GB1亚基在大鼠单个VHCs I中的表达。运用全细胞膜片钳技术及钙离子影像技术检测GABA对VHCⅠ离子电流的影响及对单个VHC I内钙离子浓度的影响。结果:在某些大鼠单个VHCsⅠ(6/94)中可检测到编码GABAB受体GBl亚基的mRNA表达,并经测序证实其与预计扩增的cDNA序列一致。GABA可降低在VHCsⅠ膜上由去极化引出的外向电流的幅度。GABAB的阻断剂CGP35348可以完全阻断这种效应,而GABAA拮抗剂Picrotoxin无法阻断此效应。运用GABAB的激动剂Baclofen可以抑制抑制某些VHCsⅠ(9/128)内由TEA和TTX分离到的钙离子电流。这种效应可以被CGP35348完全阻断,而Picrotoxin对此效应没有影响。在运用Fura-2检测胞内自由钙浓度的实验中,GABA可引起某些VHCsⅠ胞内自由钙浓度的降低。由GABA引起的效应可以被CGP35348完全阻断,而Picrotoxin对此效应没有影响。结论:研究表明GABAB受体存在于某些大鼠VHCsⅠ上,并且GABA能传出神经系统可能直接调控部分大鼠VHCsⅠ的功能。