活血、行气和补气三治法不同配伍比例对心梗后心血瘀证大鼠心功能和心肌细胞凋亡的影响

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[目的]   分析活血、行气、补气三因素不同配伍比例对心梗后心血瘀证大鼠心功能和心肌细胞凋亡的影响,探讨治疗心血瘀证大鼠的最佳治疗方案,为临床医生科学组方用药提供客观依据,以提高中医药对心梗后心血瘀证的临床疗效。   [方法]   采用结扎左冠状动脉前降支复制大鼠心梗心血瘀证模型,参照正交设计表四因素(活血法、行气法、补气法、空白对照)三水平(全剂量、1/2剂量、0剂量)分为9组,给以大鼠中药治疗,并设定模型组和假手术组。观察一般情况至灌胃治疗2周后,行血流动力学检测评价大鼠心功能,取心肌组织HE染色光镜观察心肌组织的形态学变化、电镜观察大鼠心肌细胞超微结构的变化、TUNEL检测心肌细胞的凋亡指数,免疫组化检测Caspase-3蛋白的表达情况。   [结果]   1.一般情况:①术后1~7天,治疗组和模型组大鼠均表现为拱背站立的强迫体位,呼吸急促,毛蓬松竖立,对外界刺激敏感,易激惹等心血瘀阻实证表现,并且活动量减小,饮食下降,爪背和指甲的颜色呈暗红色、轻度水肿,与假手术组相比差别明显;②术后8-14天,模型组大鼠渐出现精神萎靡,蜷缩,毛色渐黄,对外界反应稍迟钝等心气虚病证,治疗组大鼠与其相比症状较其减轻,与假手术组相比还有一定的差别,但各治疗组间症状差别不明显;③除假手术组外,其余各组大鼠临处死前体重较造模后体重均有所下降。   2.血流动力学指标测定:①与假手术组比较:模型组大鼠LVSP、±dp/dtmax显著低于假手术组大鼠,具有统计学意义(P<0.05或0.01),LVEDP高于假手术组,具有统计学意义(P<0.01);②与模型组比较:治疗组1、2、4和6组大鼠LVSP显著高于模型组大鼠,具有统计学意义(P<0.05),LVEDP显著低于模型组大鼠,具有统计学意义(P<0.05或0.01),其余各组与模型组比较无统计学意义(P>0.05);治疗组1、2组±dp/dtmax显著高于模型组大鼠,具有统计学意义(P<0.05),其余各组与模型组比较无统计学意义(P>0.05)。   3.心肌组织病理学及超微结构观察:   HE染色光镜下观察:①假手术组大鼠心肌排列整齐,细胞核清晰;②模型组大鼠心肌缺血区心肌细胞肿胀,部分细胞核溶解,炎症细胞浸润,心室前壁梗死明确,心肌变薄,梗死心肌纤维化;③与模型组相比,治疗组大鼠炎性细胞浸润减少,缺血区心肌细胞肿胀减轻,部分细胞核溶解,心肌细胞坏死减少,而且治疗组大鼠与模型组比较可见大量血管新生。   透射电镜观察:①假手术组的超微结构未见明显改变;②模型组大鼠可见细胞存在着大量凋亡,但未见明显的凋亡小体;③与模型组相比,治疗组大鼠心肌肌节结构较清晰,肌丝断裂减少,亦可见核膜皱缩,染色质凝集,胞浆空泡化等凋亡表现,但凋亡的心肌细胞数量较模型组减少。   4.TUNEL检测心肌细胞凋亡指数:①与假手术组比较:模型组大鼠心肌细胞凋亡指数显著高于假手术组大鼠,具有统计学意义(P<0.01);②与模型组比较:在非梗死区各治疗组大鼠心肌细胞凋亡指数显著低于模型组大鼠,具有统计学意义(P<0.05或0.01),在梗死交界区治疗组1、2、3、4、5、6、8组大鼠心肌细胞凋亡指数显著低于模型组大鼠,具有统计学意义(P<0.01)。   5.免疫组化检测心肌细胞Caspase-3蛋白的表达情况:①与假手术组比较:模型组大鼠心肌Caspase-3的表达显著高于假手术组大鼠,具有统计学意义(P<0.01);②与模型组比较:各治疗组大鼠在非梗死区和梗死交界区心肌Caspase-3的表达显著低于模型组大鼠,具有统计学意义(P<0.01)。   6.采用全剂量活血法、全剂量补气法、全剂量或半剂量行气法,对改善心功能疗效最好,且各因素对疗效的影响从大到小排列为活血法/补气法>行气法。   7.采用全剂量活血法、半剂量行气法、全剂量补气法,对抑制心肌细胞凋亡疗效最好,且各因素对疗效的影响从大到小排列为活血法>补气法>行气法。   [结论]   1.活血、行气、补气三治法治疗心梗后心血瘀证大鼠疗效肯定,它能减轻心肌细胞肿胀,抑制其凋亡,改善心功能,对心梗后心肌细胞具有一定的保护作用。   2.活血法、行气法和补气法三因素对治疗心血瘀证大鼠疗效的影响不同,影响心功能的因素从大到小排列为活血法/补气法>行气法,影响心肌细胞凋亡的因素从大到小排列为活血法>补气法>行气法。   3.通过正交试验设计方法,得出改善心功能的最佳方案为:全剂量活血法、全剂量补气法+全剂量或半剂量行气法;抑制心肌细胞凋亡的最佳方案为:全剂量活血法、半剂量行气法+全剂量补气法。
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