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肺癌是当前全世界威胁人类健康和严重影响生活质量的恶性肿瘤之一,也是临床中常见的恶性肿瘤。随着各种工业化的迅猛发展和控烟效果不佳的情况日趋严重,肺癌发病率在我国城镇中也同样增长迅速,目前肺癌的发病率和死亡率在恶性肿瘤中居于首位,已经是造成我国城市人口死亡的主要原因。目前肺癌在临床上主要的治疗手段有手术治疗、放化疗、免疫治疗、分子靶向治疗、中医治疗等,尽管治疗的技术在持续进步,但大多数患者预后仍然不太理想,生存率没有明显的改善,肺癌5年生存率不足20%。目前肿瘤细胞产生的辐射抗性始终是肺癌放射治疗过程中的一大难题。研究发现,NRP1在肺癌细胞辐射抗性中起到重要作用,并通过生物信息学、细胞生物学、分子生物学以及实验动物学等方法已证实NRP1可以正向调控MLL5而诱导肺癌细胞的辐射抗性。本研究将单次照射(10 Gy)野生型肺腺癌A549细胞和在体外建立肺癌细胞的辐射抗性模型(A549-RR,采用MTT法和细胞克隆形成实验来验证模型的成功与否)做比较,采用Real-time PCR和Western blot等实验方法,检测单次辐照和肺癌细胞产生辐射抗性中MLL5和EZH2的表达情况以及各自修饰的组蛋白甲基化水平的变化,然后构建干扰MLL5和EZH2基因的A549和A549-RR细胞模型,采用Real-time PCR、Western blot和流式细胞术等实验方法,探讨MLL5和EZH2在A549细胞单次受照和产生辐射抗性中调控组蛋白修饰作用及机制。首先,利用Real-time PCR和Western blot法检测A549细胞受10Gy单次照射后不同时间对MLL5和EZH2转录水平和蛋白水平的变化的影响,及其分别修饰的H3K4和H3K27甲基化的时程变化,探讨A549细胞受单次照射和获得辐射抗性后MLL5和EZH2表达变化及其调控的组蛋白甲基化水平的变化。然后,通过检测MLL5招募的复合物分子和EZH2下游基因转录水平的变化,探讨MLL5和EZH2调节组蛋白甲基化修饰的分子机制。最后,观察MLL5和EZH2对A549细胞表型的影响,阐明单次照射和产生辐射抗性的肺癌细胞的细胞周期进程变化与MLL5和EZH2调控组蛋白甲基化修饰的内在关系。本研究阐明MLL5和EZH2在肺癌细胞辐射抗性中的作用机制,为临床上提高肺癌的放疗疗效提供新的理论基础。