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大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)是一种危害性极强的植物病原真菌，它能够侵染上百种双子叶植物，造成严重的萎蔫病害。为了成功在宿主内定殖，大丽轮枝菌需要利用它的分泌系统将大量的效应蛋白和毒素因子分泌出胞外。SNARE蛋白(Soluble N-ethylmaleimide-sensitive factor attachment protein receptors)是一类分泌系统中的保守组分，它们参与了真核细胞分泌途径中至关重要的一步——囊泡与靶细胞膜的融合过程。然而，目前对大丽轮枝菌SNARE蛋白功能的了解相对较少。本研究利用反向遗传学手段，对大丽轮枝菌中两种SNARE蛋白VdSso1和VdSso2展开了一系列的功能鉴定。虽然酵母中VdSso1和VdSso2的同源蛋白存在高度冗余，但本研究结果显示，在大丽轮枝菌中VdSso1和VdSso2出现了功能分化。VdSso1敲除突变体(ΔVdsso1）的分生孢子萌发严重受损，但其菌丝极性生长正常;VdSso2敲除突变体(ΔVdsso2)的分生孢子萌发正常，并且能够产生更多的分生孢子，但其菌丝极性生长严重受损。此外，VdSso1和VdSso2均定位于营养菌丝的质膜和隔膜处，并且能与囊泡上的SNARE蛋白VdSnc1相互作用。致病性检测显示，ΔVdsso1基本丧失了对宿主植物的致病能力，而ΔVdsso2仍具有较强致病力。进一步研究显示，ΔVdsso1可以穿透宿主根部表皮细胞，但不能入侵维管组织，因此丧失致病力。最后，本研究选择了大丽轮枝菌的一种内切几丁质酶VdEC-1作为标志物来检测VdSso1在分泌过程中的作用。结果显示，当VdSso1缺失之后，VdEC-1会在突变体分生孢子内部大量聚集。 上述结果揭示，SNARE蛋白VdSso1和VdSso2具有不同的时空作用模式。VdSso1主要在分生孢子萌发和侵染宿主过程中发挥关键作用，VdSso2则主要在分生孢子产生和菌丝极性生长中发挥功能。本研究结果将为阐明效应蛋白和毒素因子的分泌途径提供重要参考，并为大丽轮枝菌的防治提供了一个潜在靶点。此外，VdSso1介导了一种内切几丁质酶VdEC-1的分泌过程，并且VdEC-1定位特异、表达量高，这也为丝状真菌中重要分泌途径的发掘提供一个有效的标志蛋白。