月季花多糖结构鉴定和抗凝血机制研究

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月季花为蔷薇科(Rosaceae)蔷薇属植物月季(Rosa chinensis Jacq.)的花,收载于中华人民共和国药典》2015年版一部中,具有活血调经,疏肝解郁之功效;主要用于治疗气滞血瘀,月经不调,痛经,闭经,胸胁胀痛。关于其化学成分,目前研究较多的是其中所含的小分子化学成分,包括黄酮、五环三萜和酚酸类等化合物,但对其中所含的多糖等大分子成分研究较少。因此,本论文选取月季花为研究对象,开展其中所含的多糖成分及具有的生物活性研究。首先采用水提醇沉、石油醚脱脂,乙醇除小分子制备月季花粗多糖,粗多糖经DEAE-52阴离子交换柱、DEAE-Sepharose FF色谱柱和Sephadex G-100色谱柱进一步分离纯化,最终得到2个多糖组分:RCJW-IA(分子量为1.2 k Da)和RCJ2-Ib(分子量为3.3 k Da)。通过酸水解,甲基化分析,并利用GC,GC-MS,FT-IR以及NMR等技术手段进行结构表征,结果表明RCJ2-Ib为→4)-β-D-Manp-(1→连接的聚甘露糖醛酸;RCJW-IA的单糖组成为阿拉伯糖、果糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖,摩尔比为0.49:0.17:2.51:7.85:4.08:2.07。其次建立大鼠急性血瘀模型,研究月季花多糖RCJ2-Ib体内抗凝血作用机制。结果表明月季花多糖RCJ2-Ib主要通过内源性凝血途径、外源性凝血途径和凝血共同途径3种途径达到抗凝血作用;RCJ2-Ib能通过减少血清中的TXB2和ET-1的含量,增加e NOS和6-Keto-PGF1α的含量以及维持6-Keto-PGF1α/TXB2的平衡抑制血栓的形成达到体内抗凝血的作用。同时,RCJ2-Ib还可以降低HCT、ESR、WBV、PV,这也在一定程度上发挥抗凝血活性。最后采用Illumina Mi Seq/Nova Seq设计PE250高通量测序平台对小鼠肠道微生物的16S r DNA的V3,V4区进行测序,优化序列经过按照97%的相似度OTU归类后,共得到1927个OTUs,通过α多样性指数和PCo A分析得知,月季花多糖RCJ2-Ib中剂量组(100 mg/kg)能维持肠道菌群的多样性、稳定性和丰富度,在门、属水平上对维持正常大鼠肠道菌群的丰度更有利。
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