三氯乙烯（trichloroethylene，TCE）是一种无色透明具有挥发性被五金、电子、电镀、塑胶等行业广泛使用的有机氯溶剂。职业工人主要通过呼吸道和皮肤暴露于TCE，部分接触TCE的患者会出现职业性三氯乙烯药疹样皮炎（ODMLT）。ODMLT病情较为凶险，治疗周期长，病死率高，而且疾病经济负担很重，因此，ODMLT患者的救治已经成为职业卫生领域的重要任务和难题之一。我国卫生部于2006年将职业性三氯乙烯药疹样皮炎列为职业病并发布了其详细的诊断标准，将ODMLT定义为以急性皮肤炎症反应为主要表现的全身性变应性疾病，其临床表现除皮肤损害、浅表淋巴结肿大和发热外，其肝脏、肾脏、免疫系统等也受到不同程度的损害，其中ODMLT患者肾功能衰竭是导致死亡的主要原因之一。本课题组前期研究发现TCE经皮致敏阳性组小鼠Th17细胞和其相应分泌的细胞因子（白介素-17）IL-17有明显升高，同时研究发现补体（C3a受体）C3aR在小鼠肾脏有明显的沉积，C3aR是补体系统的重要组分之一，其与补体中心组分C3a相结合可作为重要的炎症介质介导CD4+T细胞的分化参与多种肾脏疾病的发生。
　　研究目的:
　　本研究的主要目的是通过建立TCE经皮致敏BALB/c小鼠模型，探讨在TCE所致的肾脏炎症反应中，C3aR对Th17细胞分化的调控作用机制。通过腹腔注射C3aR抑制剂（C3aRA）竞争性抑制C3aR的表达，检测小鼠肾脏病理学和肾功能，炎症介质和C3aR的表达，Th17细胞的积累，以及信号转导子和转录激活因子3（STAT3）在局部肾脏中的活化，从而进一步探讨TCE致敏小鼠免疫性肾脏损伤的具体机制。
　　研究方法:
　　50只BALB/c小鼠适应性饲养一周后，随机分为空白对照组（5只）、溶剂对照组（5只）、TCE处理组（20只）和TCE+C3aRA联合处理组（20只），根据课题组前期研究建立TCE经皮致敏BALB/c小鼠模型。在第17和19天初末次激发前30分钟，TCE+C3aRA联合处理组小鼠分别腹腔注射C3aR抑制剂SB29015710mg/kg。在末次激发24小时后，对小鼠背部反应进行评分。根据背部皮肤反应评分标准，评分≥1分的小鼠为致敏阳性组小鼠，评分=0分的小鼠为致敏阴性组小鼠。即将TCE处理组分为TCE致敏阳性（TCE+）组和TCE致敏阴性（TCE-）组，将TCE+C3aRA联合处理组分为TCE+C3aRA联合处理致敏阳性（C3aRA/TCE+）组和TCE+C3aRA联合处理致敏阴性（C3aRA/TCE-）组。所有小鼠于末次激发后72小时进行小鼠摘眼球取血，并用颈椎脱臼法处死小鼠后，无菌取小鼠肾脏。血清用于检测小鼠肌酐（Cre）、尿素氮（BUN）和炎症因子白介素-6（IL-6）的水平。取部分肾脏制作成石蜡切片用于小鼠肾脏病理性结构损伤检测以及免疫组化法检测小鼠炎症因子（单核细胞趋化蛋白-1）MCP-1、（白介素-1β）IL-1β、IL-6和（白介素-23）IL-23在肾脏的沉积水平，另外取一部分肾脏制作成冰冻切片使用免疫荧光法检测C3aR的表达和Th17细胞的积累，剩下部分用于Western Blot检测t-STAT3和（磷酸化-STAT3）p-STAT3蛋白水平及qRT-PCR检测小鼠肾脏C3aR基因水平。
　　研究结果:
　　1.空白对照组、溶剂对照组小鼠致敏率均为0%；TCE处理组小鼠致敏率为45.0%；TCE+C3aRA联合处理组小鼠致敏率为35.0%。
　　2.TCE处理组小鼠肾脏病理性损伤发生率为35.0%；TCE+C3aRA联合处理组小鼠肾脏病理性损伤发生率为25.0%。
　　3.小鼠肾脏病理结果显示，在空白对照、溶剂对照、TCE-和C3aRA/TCE-组中均观察到肾小球和肾小管的完整结构以及肾细胞的有序排列。在T CE+组中，发现肾小球细胞增殖，肾小管细胞肿胀和肾小管形态学改变，而在C3aRA/TCE+组上述情况有明显改善。
　　4.TCE+组和C3aRA/TCE+组小鼠血清Cre和BUN水平明显高于空白对照组、溶剂对照组、TCE-和C3aRA/TCE-组，且TCE+组Cre和BUN水平高于C3aRA/TCE+组。
　　5.小鼠血清中IL-6检测结果显示TCE+组和C3aRA/TCE+组血清中IL-6的水平分别高于空白对照组、溶剂对照组、TCE-组和C3aRA/TCE-组；空白对照组、溶剂对照组、TCE-组和C3aRA/TCE-组之间未发现统计学差异。
　　6.小鼠肾脏C3aR mRNA检测结果显示TCE+组肾脏C3aR mRNA水平高于空白对照组、溶剂对照组、TCE-组和C3aRA/TCE-组；C3aRA/TCE+组与TCE+组小鼠肾脏C3aR mRNA水平相比无明显差别。
　　7.C3aR在小鼠肾脏的表达免疫荧光结果显示在TCE+组中，C3aR主要在受损肾脏的肾小球上表达，而在空白对照组、溶剂对照组、TCE-组、C3aRA/TCE-组和C3aRA/TCE+组中C3aR的表达很少。
　　8.MCP-1、IL-1β，IL-6和IL-23四种炎症介质免疫组化结果显示在空白对照组、溶剂对照组、TCE-组和C3aRA/TCE-组小鼠肾脏中没有观察到MCP-1、IL-1β，IL-6和IL-23四种炎症介质的可见表达；TCE+组小鼠肾脏中MCP-1、IL-1β，IL-6和IL-23水平均显著高于溶剂对照组和TCE-组；而与TCE+组相比，C3aRA/TCE+组MCP-1、IL-1β，IL-6和IL-23水平均下降。
　　9.Th17细胞在小鼠肾脏沉积的免疫荧光双标结果显示，在TCE+组中呈现Th17细胞的大量积累，而在空白对照组和溶剂对照组中观察到很少；同时尽管在C3aRA/TCE+组中CD4阳性染色似乎没有减少，但在C3aRA/TCE+组中显示较少的IL-17A阳性染色和较少的IL-17A和CD4重叠，这似乎显示C3aRA/TCE+组比TCE+组Th17细胞的积累减少；在空白对照组、溶剂对照组、TCE-组和C3aRA/TCE-组中未发现可见的IL-17A和CD4重叠。
　　10.t-STAT3和p-STAT3蛋白Western Blot结果显示在t-STAT3和p-STAT3的western印迹条带中空白对照组、溶剂对照组、TCE-组或C3aRA/TCE-组的灰度值无显著差异；与溶剂对照组相比，TCE+组和C3aRA/TCE+组的p-STAT3灰度值在统计学上更高，而C3aRA/TCE+组p-STAT3的灰度值低于TCE+组。
　　研究结论:
　　C3aR信号传导可能通过TCE致敏中局部肾脏炎性损伤中STAT3的磷酸化来促进炎症微环境并调节Th17细胞分化从而加重肾脏损伤。