PtAP3、PtAG、PtAP1不育结构转化毛白杨和拟南芥的研究

来源 :北京林业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:dai_dx
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毛白杨(Populus tomentosa Carr.)是优良的绿化和用材树种,但是毛白杨在花期有飞絮散粉现象,给人们的生产生活带来诸多不便。为获得不飞絮、不散粉的不育毛白杨,本研究将不育结构35S-PtAP3-IR-NOS、35S-PtAG-IR-NOS、35S-PtAG-IR-NOS(MAR)、35S-PtAP1-IR-NOS、35S-PtAP1::PtAG-IR-NOS、35S-AP1M2-E9和35S-AP1M3-E9分别转化毛白杨,并初步获得PCR阳性植株。由于毛白杨生长周期长、花期晚,为了检验不育结构的作用,本研究将不育结构35S-AP1M2-E9转化到拟南芥中,对转基因拟南芥进行了分子检测和表型分析,为毛白杨转化和鉴定提供基础依据。主要结果如下:   利用毛白杨无性系TC1521进行遗传转化,经PCR验证,共获得阳性转化植株55株,其中转35S-PtAP3-IR-NOS阳性植株9株,转35S-PtAG-IR-NOS阳性植株5株,转35S-PtAG-IR-NOS(MAR)的阳性植株6株,35S-PtAP1-IR-NOS阳性植株4株,转35S-PtAP1::PtAG-IR-NOS阳性植株6株,转35S-AP1M2-E9阳性植株7株,转35S-AP1M3-E9阳性植株8株,转空载体pART27阳性植株10株。转化率分别为1.6%、0.9%、1.1%、0.7%、1.1%、1.2%、1.5%和2.2%。   获得转35S-PtAP3-IR-NOS阳性植株的拟南芥12株,通过荧光定量检测转基因植株中外源基因AP3的表达量,发现不同株系间表达量一致,差异较小,相对表达量最高的株系为内参的4.96倍,最低的株系为内参的3.02倍。转基因植株中的上游基因LFY、PI基因相对表达量与野生型对照相比下降明显,而下游基因Sep2、Sep3、Sep4相对表达量与野生型对照比较没有太大变化。   对转基因拟南芥进行表型观察,发现转35S-AP1M2-E9不育结构的拟南芥与对照相比,开花甲均推迟10.6天,部分植株在观察期间内未成花。不育结构对部分转基因拟南芥的营养性生长有一定的影响。对照植株营养生长正常,转基因株系营养生长状况受影响较为明显。同时,不育结构会导致花器官表型的变异,转基因拟南芥花器官主要表现出的变异有花萼不完整、小而残缺,花瓣数减少,雄蕊数减少等。
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