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Periaxin蛋白是有髓施旺细胞特异表达的一种蛋白,该蛋白对维持髓鞘的稳定起着重要的作用,其突变将导致腓骨肌萎缩症4F亚型的发生。Periaxin基因由于mRNA不同的剪切方式可以编码两种长短不同的含PDZ结构域的蛋白,即L-periaxin和S-periaxin。L-periaxin具有PDZ domain、核输入信号NLS、Repeat domain、Acidic domain四个结构域,S-periaxin只含有PDZ结构域。虽然periaxin蛋白发现已经20多年,但S-periaxin蛋白的结构和功能仍不清楚。本文围绕S-periaxin蛋白展开以下工作。首先以大鼠来源的RSC96细胞的cDNA为模板,进行PCR扩增S-periaxin基因,将其克隆至表达载体pET-M-3C上。利用定点突变技术对S-periaxin的半胱氨酸残基进行突变,从而获得了不同的突变体pET-M-3C-S-periaxm (C88/G、C97/G、C139/G、C88、97/G、C88、139/G、 C97、139/G、C88、97、139/G)。将重组质粒转入Ecoli BL 21中,利用IPTG诱导表达,重组表达产物经Ni-NTA、Sephacryl S-200凝胶层析获得重组蛋白His-S-periaxin及其突变体蛋白。戊二醛交联分析体外His-S-periaxin蛋白的聚合状态,表明S-periaxin蛋白在体外易于形成一系列不同聚合度的同源聚合物。进一步免疫共沉淀也表明S-periaxin蛋白存在同源蛋白间互作。另外利用H202氧化、DTT还原、非还原SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳等方法分析,结果显示在氧化条件下,His-S-periaxin蛋白形成二聚体,此二聚体可以被DTT重新还原成单体。对S-periaxin中三个Cys进行分析发现,半胱氨酸残基(Cys)参与了二聚体的形成且Cys88和Cys139对氧化压力的敏感度比Cys97高。其次,通过PCR扩增mCherryl-159和mCherry 160-237两片段,将其分别连接到pQE-30、pET-28a载体上构建了基于mCherry的红色双分子荧光互补原核系统,并利用GFP蛋白间微弱的相互作用验证双分子荧光互补原核系统的可行性,进一步将S-periaxin及其突变体基因分别连接到双分子荧光互补原核载体上,结果显示在大肠杆菌细胞内S-periaxin蛋白也是通过半胱氨酸残基互作形成二聚体。此外我们将mCherry1-159和mCherry 160-237分别克隆到载体pEGFP-N1、pEGFP-C1上构建了基于mCherry的红色双分子荧光互补真核系统,将S-periaxin及其突变体基因连入该系统,结果显示S-periaxin蛋白在RSC96细胞内发生同源蛋白间互作。