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共轭亚油酸（conjugated linoleic acid，CLA）是一种共轭双键的十八碳二烯酸的几何异构体的总称。亚油酸异构酶是生物转化共轭亚油酸的一个关键酶。研究发现，共轭亚油酸是一种很强的抗癌物质，并具有增强免疫力、减少脂肪在体内的积累、促进生长以及缓解风湿性关节炎的作用。随着研究成果的积累和分子生物学技术的发展，为阐明CLA产生的机理，亚油酸异构酶的研究热点逐渐转向了酶基因的结构、功能、调控和性质。 本研究以植物乳杆菌P8为出发菌株，采用N+离子注入的方法进行诱变，经酶活测定，得到稳定遗传负突变菌株6株。为研究突变机理，阐明CLA产生的机制奠定基础，从而更好地为利用乳酸菌生产CLA保健奶提供理论依据。 依据 GenBank中已公布的亚油酸异构酶基因，设计一对特异性引物，对野生菌株和6株突变株进行PCR扩增，得到亚油酸异构酶基因大小约为1700bp。植物乳杆菌P8亚油酸异构酶基因经连接、转化后测序，在GenBank上注册该基因序列，编号为HM569265。分析乳酸杆菌（CP001617）基因组全序列，设计了亚油酸异构酶基因上游非编码区805bp片段的特异性引物，对野生菌株和6株突变株进行PCR扩增，将植物乳杆菌P8亚油酸异构酶上游非编码区片段经连接、转化后测序。 对亚油酸异构酶基因进行生物信息学分析，包括：基因同源性分析、翻译为氨基酸序列、氨基酸序列比对、跨膜区预测、功能结构预测、蛋白质二级结构预测、蛋白质三级结构的构建等。并且对亚油酸异构酶上游非编码区片段也进行生物信息学分析和预测，预测出12个基序、180个调控元件。利用矩阵分析，预测出6段转录元件以及12个结合元件。 为了使SSCP效果明显，查找亚油酸异构酶基因及其上游非编码区片段酶切位点Sma I和Cal I，使用Sma I将野生菌株和6株突变株亚油酸异构酶基因的PCR产物酶切为大小约为900bp、550bp、250bp三个片段，使用Cal I将野生菌株和6株突变株亚油酸异构酶上游非编码区基因的PCR产物酶切为大小约为700bp、200bp两个片段。使用SSCP方法，相对比野生菌株直观检测6株负突变菌株的突变情况，亚油酸异构酶基因突变效果显著，而上游非编码区基因突变效果不明显。将亚油酸异构酶基因及其上游非编码区基因进行测序，对比出发原始菌株后，寻找核苷酸突变位点，对生物信息学的预测进行验证和说明。