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茉莉酸(jasmonic acid,JA)是植物体内的一种重要的次生代谢产物,是一种新型的植物内源激素,它能够增强植株自身抗病性和抗逆性、提高对环境的竞争力和适应力等等。丙二烯氧化物合酶(allene oxide synthase,AOS)是JA合成的关键酶。AOS与JA的生物合成关系密切,它可以通过控制JA的生物合成,从而参与到许多调节植物的生理过程中,为研究葡萄AOS在脂肪酸合成途径中的作用,本试验以酿酒葡萄品种赤霞珠(Vitis vinifera L.cv.Carbemet Sauvignon)为试材,以反转录 PCR 方法获得一条AO 基因的全长序列并将其命名为VvAOS,并在原核细胞中进行了表达。同时也对在创伤处理和外源茉莉酸甲酯(Methyl jasmonate,MeJA)的处理下,VvAOS基因的表达特性进行了初步研究。其结果如下:1.根据葡萄基因组(PN40024)、其他已登录的植物AOS基因和葡萄AOS的EST序列,拼接预测葡萄AOS序列的开放阅读框并设计引物,克隆得到VvAOS基因,其全长为1452bp,编码483个氨基酸。序列分析可知VvAOS编码的蛋白与其它植物AOS蛋白相似性较高,属于细胞色素P450超基因家族中,CYP74A家族的一员。2.通过实时荧光定量分析,结果显示机械创伤和喷施外源茉莉酸甲酯能够使VvAOS的表达水平发生改变,在处理之后一定时间内表现出迅速升高的趋势并且在一定时间内维持在高表达水平上。其中VvAOS表达量在引入创伤后0.5h稍有下降,随后急剧提高,至12h达到至最高水平,其后到24h稍有下降。在喷施外源茉莉酸甲酯处理之后,葡萄AOS基因的表达量逐渐升高,并且在24h时处达到最高水平。3.构建了原核表达载体pMAL c4x-VvAOS和pET 32a(+)-VvAOS,将两种载体转化进表达宿主菌E.coli BL21(DE3)后,在终浓度0.1mMIPTG诱导下150rpm 22℃培养22h,将产物进行了硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(即SDS-PAGE),得到约90KD和78KD的融合蛋白表达条带,除去两种原核表达载体自身融合的蛋白大小后,得到的蛋白与VvAOS基因编码约55kD蛋白的大小基本相一致。这表明葡萄AOS基因可以在大肠杆菌表达系统中进行高效表达。