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草履虫是原生动物纤毛纲中的一种极其具有代表性意义的原生动物。它具有许多的特点,研究者们常常喜欢用它作为检测试剂生物活性的对象生物。第一,草履虫存在范围比较广,能够比较容易并且方便的采集到;第二,草履虫的生命力对比其他单细胞动物较强,更容易培养起来;第三,草履虫的个体比其他单细胞动物的个体较大,这样更容易研究与观察;第四,草履虫反应比较灵敏,相比于其他复杂的多细胞生物,草履虫对毒性物质的反应更为敏锐,减少了反应时间,能够更直观、准确的反应出化合物的毒性;第五,相比于一般的化学方法的呆板,草履虫作为反应对象能够更加的形象并且生动有效的体现反应的过程和结果。海洋微生物跟大陆微生物的生存环境存在着非常迥异的差别,具有低温、高压、缺氧、高温等特点,使海洋微生物产生了跟大陆微生物完全迥异的奇特并且又很繁杂的代谢方式、适应环境的方式和生存繁殖的方式,从而代谢产生了许多化学构造特别并且有着多种生物活性的次生代谢产物。因此它的次生代谢产物有着非常重大的研究意义。 本文对分离自绿藻刺松藻(Codium fragile)和金膜藻(Chrysymenia wrightii)的两株真菌长枝木霉(Trichoderma Longibrarachiatum)和集峰曲霉(Aspergillus nomius)选用了不同的培养基进行了规模发酵,分离纯化了这两株菌的次生代谢产物,并且对所得的大部分化合物进行了草履虫抗性研究。次生代谢产物采用了硅胶柱层析、凝胶Sephadex LH-20柱层析、重结晶、制备薄层层析、高效液相色谱等分离纯化方式,一共得到了10个单体化合物,综合运用现代波谱技术(1H-NMR、13C-NMR、DEPT等)、化学方法及与已报道的文献比对对各个单体化合物的结构进行鉴定。对所得化合物进行草履虫抗性实验,从长枝木霉(Trichoderma Longibrarachiatum)分离到的5α,8α-环氧麦角甾-6,22-二烯-3β-醇对草履虫的24 h半致死浓度为1.958μg/mL,麦角-7,22-二烯-3β,5α,6β-三醇对草履虫24h半致死浓度为2.108μg/mL,β-谷甾醇对草履虫的24h半致死浓度为1.907μg/mL,5-羟基-3-甲基戊-2-烯酸对草履虫的24 h半致死浓度为5.613μg/mL,harziane二萜对草履虫的24 h半致死浓度为1.153μg/mL。从集峰曲霉(Aspergillus nomius)分离到的5α,8α-环氧麦角甾-6,22-二烯-3β-醇对草履虫的24 h半致死浓度为1.907μg/mL,(24R)-24-甲基胆甾4,22-二烯-3-酮对草履虫的24 h半致死浓度为2.827μg/mL,豆甾-4,22-二烯-3-酮对草履虫的24 h半致死浓度为2.376μg/mL,豆甾-4-烯3-酮对草履虫的24 h半致死浓度为2.245μg/mL。通过实验发现,海藻内生真菌的次生代谢产物对草履虫具有毒杀作用,并且在一定的范围内致死率与化合物浓度呈现出线性关系,其中萜类化合物对草履虫的毒杀作用最强,甾体类化合物对草履虫的毒杀性大于酮类化合物,草履虫对5-羟基-3-甲基戊-2-烯酸的抗性最强。