广西猪粪源沙门氏菌和肉源沙门氏菌生物学特性比较研究

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沙门氏菌是世界公认的能导致很多食源性疾病的病原菌。沙门氏菌病不仅能引起猪的感染,而且具有在环境中传播细菌病原体的风险。受污染的猪肉产品是食源性疾病的主要来源。沙门氏菌可以在环境中生存很长一段时间。由于养猪业是广西一个重要的产业,对广西猪源沙门氏菌进行分离鉴定及生物学特性的研究是非常重要的。为养猪产业链控制沙门氏菌提供理论依据,本研究包括4个部分:1猪粪源和猪肉源沙门氏菌分离及血清型鉴定。从广西3个不同地区的几个规模化猪场采集健康猪的猪粪287份,沙门氏菌分离鉴定方法根据国家食品药品监督管理总局安全标准的食品安全微生物检验:沙门氏菌(GB4789.4-2010)。用invA基因进行PCR进行进一步的确认。结果分离到6株粪源沙门氏菌,平均分离率为2.09%。从南宁12个菜市场采集共174份生猪肉分离鉴定沙门氏菌。分离到到20株猪肉源沙门氏菌,平均分离率为11.49%。通过玻片凝集实验,猪粪源沙门氏菌分布在B、E1、C1、C2等4个血清群,猪肉源沙门氏菌分布在B、E1、C2等3个血清群。德尔卑沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌是粪源沙门氏菌流行的主要血清型,而德尔卑沙门氏菌是猪肉源沙门氏菌流行的主要血清型。2沙门氏菌分离株致病性和毒力基因的检测。小白鼠致病性实验结果显示:6株猪粪源沙门氏菌判定为强致病性(4株,占66.67%),中等致病性(1株,占16.67%),弱致病性(1株,占16.67%);20株猪肉源沙门氏菌判定为强致病性(13株,占65.00%),中等致病性(4株,占20.00%),无致病性(3株,占15.00%).根据5个毒力基因(mogA、ssel、 mgtC、siiE、sopB)检测结果,39株粪源沙门氏菌的基因检出率分别为89.74%(mogASPI1),100.00%(sselSPI2),100.00%(mgtCSPI3),92.31%(siiESP I4),100.00%(sopBSPI5)。20株猪肉源沙门氏菌的基因检出率分别为85.00%(mogASPI1),100.00%(sselSPI2),100.00%(mgtCSPI3),65.00%(siiESP I4),90.00%(sopBSPI5)。结果表明,所有沙门氏菌分离株没有检测出缺失ssel(SPI2)和mgtC(SPI3)毒力基因。发现致病性与mogA(SPI1)基因有很大的关系。在缺失nogA(SPI1)基因的7株分离株中,2株中等致病性,1株弱致病性,4株无致病性。与猪粪源沙门氏菌相比,猪肉源沙门氏菌缺失siiE(SPI4)和sopB(SPI5)比例更高。3抗菌药物的敏感性测试和耐药基因的扩增。用25种抗生素对26株沙门氏菌进行药物敏感性测试。结果显示,不同的分离株表现出不同的抗生素抗性。6株猪粪源沙门氏菌平均耐10种抗生素,20株猪肉源沙门氏菌平均耐4种抗生素。猪粪源沙门氏菌比猪肉源沙门氏菌耐药菌谱更宽。2011-2012年分离到的6株粪源沙门氏菌(平均耐9种抗生素)比2010-2011年分离到的粪源沙门氏菌(平均耐7种抗生素)粪源沙门氏菌耐药菌谱在增宽。所有分离菌株对青霉素类、四环素类、磺胺类、苯丙醇类抗生素耐药较严重,对内酰胺酶类、氟喹诺酮类、喹诺酮类、硝基呋喃类、氨基糖苷类较敏感。根据猪粪源沙门氏菌的结果,耐药表型与耐药基因(喹诺酮类、β内酰胺类、氨基糖苷类、磺胺类、氯霉素类、四环素类)的对应率在83.33%-100.00%之间,平均检测出14种耐药基因,cmlA检出率达100.00%。根据猪肉源沙门氏菌的结果,耐药表型与耐药基因(喹诺酮类、p内酰胺类、氨基糖苷类、磺胺类、氯霉素类、四环素类)的对应率在50.00%-100.00%之间,平均检测出6种耐药基因,耐药基因的检出率在5.00%-75.00%之间,cmlA和tetA的检出率达75.00%。耐药表型与耐药基因有很大的相关系。6株猪粪源沙门氏菌intI1基因的检出率为100.00%,20株猪肉源沙门氏菌的检出率为25.00%,没有检测出intI2、intI3基因。intI1整合子与细菌多重耐药有密切关系。4沙门氏菌分离株生物膜形成59株沙门氏菌判定为无粘附能力(13株,20%),弱粘附能力(20株,33.9%),中等粘附能力(6株,10.17%),强粘附能力(20株,33.9%),79.64%的菌株有粘附能力。75.00%的鼠伤寒沙门氏菌有强粘附能力,1.7.39%德尔卑沙门氏菌有强粘附能力。38株猪粪源沙门氏菌(占猪粪源沙门氏菌97.44%)有粘附能力,9株猪肉源沙门氏菌(占猪肉源沙门氏菌45%)有粘附能力。11株粪源德尔卑沙门氏菌全部(100%)有粘附能力,其中强粘附能力4株(36.36%);而12株肉源德尔卑沙门氏菌只有5株(41.67%)有粘附能力,其中4株为弱粘附株,1株为中等粘附株。可见同一血清型的粪源沙门氏菌比肉源沙门氏菌形成生物膜比例更高,且同一血清型粪源沙门氏菌比肉源沙门氏菌更趋向于更强的成膜能力。研究结果表明:沙门氏菌生物膜形成能力与血清型和来源都有一定的关系,需要进一步研究。
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