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背景与目的据全世界和国内最新肿瘤统计数据显示,食管癌是导致癌症患者死亡的最常见肿瘤之一[1,2]。就全球食管癌总数进行分析,我国食管癌的发生总数占了近50%,且主要组织学类型为食管鳞状细胞癌,约占每年新发病例数的90%[3]。近年来,依靠先进的食管癌诊断和治疗技术,食管鳞状细胞癌的死亡率已经开始下降,但食管鳞状细胞癌患者手术后,5年生存率也仅为35%-45%,依旧不容乐观[4,5]。有研究认为,其中一个最主要的原因是,现阶段食管鳞状细胞癌所使用的TNM分期并不能准确对患者进行分期,导致可切除食管鳞状细胞癌患者的临床分期不够准确,从而影响患者的治疗和预后[6]。有报道表明,根据现有TNM分期标准,一些分期较早的食管鳞状细胞癌患者,在实施食管切除术后不久,便可以发现原发部位肿瘤复发、进展,有些患者甚至发生了远处转移[7]。所以,寻找可靠的预测食管鳞状细胞癌预后的生物标记物,辅助提高TNM分期系统的准确性是非常有必要的。在过去的十几年间,长链非编码RNA逐渐进入科研人员的视野,越来越受到科研领域,尤其是肿瘤专家的重视[8]。尽管长链非编码RNA不能编码蛋白质,但被发现参与调控肿瘤细胞的各种生物学行为,包括肿瘤生长、侵袭、转移等[9]。例如,lncRNA HOTAIR（HOX antisense intergenic RNA）在一些人类肿瘤中是最重要的致癌lncRNA之一,比如乳腺癌、肝细胞癌和结直肠癌[9]。HOTAIR通过调节基因表达和染色体结构的稳定性,来调节肿瘤的增殖、迁移,并影响肿瘤对化疗药物的敏感性。长链非编码RNA XIST（X-inactive specific transcript）受基因组印记的调控,正常情况下不表达,但是在肺癌、胃癌和食管鳞状细胞癌中异常表达[10-12]。由于长链非编码RNA有非常强大的调节功能,并在某些组织特异性表达,所以被认为是最有希望的肿瘤生物标志物,可用于癌症的诊断、治疗和预后分析[13]。LINC01133是一个非常重要的长链非编码RNA,定位于一号染色体长臂二区三带（1q23）上。LINC01133最初在肺鳞状细胞癌中发现,在癌组织中高表达[14]。LINC01133通过与下游靶基因EZH2、LSD1和miR422a的结合,可以明显促进肺癌和骨肉瘤细胞的迁移和侵袭能力,敲除LINC01133后细胞的迁移和侵袭能力受到明显抑制[15,16]。但是,最新的两个研究显示,在结直肠癌中,LINC01133呈低表达。进一步的研究表明,LINC01133通过与SRSF6蛋白的相互作用,抑制癌症转移和上皮间质转分化（epithelial–mesenchymal transition（EMT））,发挥抑癌基因的作用。这些矛盾的研究结果表明,LINC01133在癌症的转移和侵袭表现出相反的生物学效应,可能主要取决于癌症的种类,即组织特异性。但是,LINC01133在食管鳞状细胞癌中的表达量和预后价值尚未明确。研究目的:研究LINC01133在食管鳞状细胞癌中的表达量,及其与食管鳞状细胞癌患者临床病例资料的相关性。方法:1.食管鳞状细胞癌组织样本收集。本课题组收集了2007年1月至2009年12月中山大学肿瘤防治中心149对（癌组织和正常组织）食管癌病人术后组织样本。食管癌组织样本筛选条件:（1）病人在手术前均未诊断为远处转移,且未接受过任何治疗;（2）所有收集的病人组织样本,经两名病理专家确认为食管鳞状细胞癌;（3）患者术前未出现任何严重并发症,也未患有其他恶性肿瘤。所有病人均按照国际抗癌联盟（the International Union against Cancer（UICC））制定的TNM分期法（第七版）进行肿瘤分期。所有病人总生存期（Overall survival（OS））均从食管癌根治性外科手术实施日期开始算,直至病人死亡或者最近的一次随访时间为止。所有病人无进展生存期（progression-free survival（PFS））均从食管癌根治性手术日期开始算,直至患者肿瘤复发、转移或最近的一次随访时间为止。本研究经中山大学肿瘤防治中心伦理委员会审核批准,组织病理样本的收集在术前已经征得患者的同意。2.食管癌细胞系和细胞培养。九株食管癌细胞系（KYSE-140,KYSE-150,KYSE-180,KYSE-30,KYSE-410,KYSE-510,KYSE-520,EC-18 and HKESC1）和一株永生的正常食管上皮细胞NE-1均购于德国（the Deutsche Sammlung vonMikroorganismen und Zellkulturen（DSMZ,Braunschweig,Germany））。将九株食管癌细胞及一株永生的正常食管上皮细胞NE-1放入37℃,含5%二氧化碳的细胞培养箱进行培养。九株食管癌细胞使用加10%胎牛血清的1640培养基进行培养,NE-1细胞使用特殊培养基进行培养。所有细胞均培养至对数生长期,再开展相关实验研究。3.实时荧光定量PCR检测。检测食管癌细胞及组织中LINC01133的表达水平。用Trizol试剂提取所有食管鳞状细胞癌患者组织样本和细胞的RNA,经过260/280 nm吸光度的分光光度计测过RNA浓度后,使用同种试剂盒逆转录为cDNA,通过qRT-PCR检测LINC01133在食管鳞状细胞癌患者组织样本和细胞的表达量。4.数据分析。使用SPSS 23.0对所有数据进行分析。LINC01133在食管癌组织和配对的正常组织的相对表达量,使用配对t检验进行计算;采用卡方（Chi-square）或者费舍尔确切概率法（Fisher’s exact test）分析LINC01133的表达量和食管癌病人临床病理资料间的相关性;采用卡普兰?迈耶法（Kaplan–Meier method）对食管癌患者进行生存分析,采用对数秩检验（the log-rank test）来评估不同分组及亚组病人间的统计学差异。为了找到能反映食管癌患者总生存时间和无病生存时间的独立预后因子,我们采用了单变量和多变量Cox比例风险回归分析（Univariate and multivariate Cox proportional hazards regression analyses）对患者的临床病理资料进行筛查。所有P值都采用双侧检验的方式,小于0.05将结果定义为有统计学意义。结果:总的来说,我们的研究表明,LINC01133在食管鳞状细胞癌总的相对表达量明显低于正常组织。LINC01133可能作为肿瘤抑制因子,在早期食管癌的进展中发挥了重要作用。更重要的是,我们的研究数据显示,食管鳞状细胞癌患者是否饮酒能够明显影响LINC01133在预测食管癌预后中的价值,我们将LINC01133的表达量、患者是否饮酒以及TNM分期进行联合使用,能够更好的预测出食管切除术后高复发患者,并建议这些患者术后采取进一步治疗。无论如何,关于酒精如何影响LINC01133在食管鳞状细胞癌中的功能,这还有赖于将来更深入的机制研究。结论:1.LINC01133在食管鳞状细胞癌组织中较正常组织表达低,在九株食管癌细胞系中表达明显低于永生的正常食管上皮细胞。2.在食管鳞状细胞癌肿瘤进展及生活方式不健康患者中,LINC01133表达量较低。3.LINC01133表达量下调,可能对食管鳞状细胞癌患者的预后有不良影响。4.LINC01133在食管鳞状细胞癌患者中的预后意义受到患者饮酒的影响。5.通过联合LINC01133的表达量、患者是否饮酒和TNM分期,能够更好的预测食管鳞状细胞癌的生存。