组织蛋白酶B(cathepsin B，CB)是存在于溶酶体中的一种半胱氨酸蛋白水解酶，属于番木瓜蛋白酶家族。CB在人的肝、脾、肾、骨、神经细胞、间质成纤维细胞、巨噬细胞等都有分布，在中性及酸性条件下均具有活性，碱性条件下会不可逆的失活。其作用非常广泛，CB参与酶原激活、抗原处理和组织重塑，尤其骨基质吸收等多种生理功能及病理过程。更为重要的是，CB能够直接降解或激活纤溶酶原激活剂(plasminogen activator，PA)及基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMP)等而间接降解LN、纤维连接蛋白及Ⅳ型胶原等许多细胞外基质和基底膜成分，破坏其结构的完整性从而促进肿瘤的浸润转移。近来大量的研究表明CB在肺癌、乳腺癌、前列腺癌、胃癌、肝癌、食管腺癌、黑色素瘤、神经胶质细胞瘤等多种恶性肿瘤组织中呈现高表达，且其表达及活性均成倍甚至3-9倍的高于邻近正常组织，另外，还发现CB参与肿瘤的发生、发展及新生血管的生成，而且CB转录、表达水平的高低与肿瘤的预后呈正相关。层粘连蛋白(laminin，LN)是细胞外基质和基底膜成分的一种非胶原糖蛋白，主要由上皮细胞和内皮细胞合成及分泌。它通过高亲和力的层连接蛋白受体与细胞起反应，从而介导细胞与基底膜的粘连。已有研究表明，LN在细胞增殖、分化、迁移、黏附、胚胎发育、神经生长、肿瘤的发生、浸润转移及维持基底膜结构完整性等发面发挥着重要作用。近年来黏附分子在肿瘤的浸润转移过程的作用备受关注。Syndecan-1就是其中主要的黏附分子，并在该过程中发挥着重要的作用。Syndecan-1是种跨膜硫酸乙酰肝素糖蛋白(heparan sulfate proteoglycan，HSPGs)，属于黏附分子整合素跨膜黏结蛋白聚糖家族成员，存在于大多数上皮细胞表面，在细胞表面介导与细胞外配体的连接作用，使细胞黏附更具有稳定性，与细胞的迁移有关，能维持分化表型及抑制肿瘤的生长，研究发现Syndecan-1在人类多种恶性肿瘤组织中表达降低或缺失，从而促进肿瘤的生长、侵袭及转移。食管癌是我国常见的恶性肿瘤之一，河南省是高发省份，其浸润、转移又是引起食管癌患者死亡的主要原因，因此对食管癌浸润、转移机制的探讨成为研究热点之一。有关食管癌中CB和LN、Syndecan-1三者之间相互关系的研究，至今国内外文献报道较少。为进一步探讨食管癌的浸润、转移机制，寻找抑制食管癌浸润、转移的有效方法，提高食管癌患者的生存时间。本研究采用免疫组化及原位杂交技术，分别观察了食管癌高发区49例食管鳞癌组织、30例癌旁非典型增生组织及49例正常食管黏膜组织中CB和Syndecan-1蛋白及mRNA的表达情况；采用免疫组化方法检测了LN蛋白的表达情况。该研究为进一步阐明食管癌的浸润、转移机制及抑制食管癌的浸润、转移提供了理论基础。方法1．采用免疫组化SP技术分别对49例食管鳞癌组织、30例癌旁不典型增生组织和49例正常食管黏膜组织中CB、Syndecan-1及LN蛋白表达进行检测。2．采用原位杂交技术分别对49例食管鳞癌组织、30例癌旁不典型增生组织和49例正常食管黏膜组织中CB和Syndecan-1mRNA表达进行检测。3．统计学处理：所有数据均经SPSS10.0软件进行统计分析。阳性率之间的比较采用x~2检验(chi-square)；两变量之间的关系分析采用相关分析。显著性水准为α=0.05。结果1．有无淋巴结转移组CB蛋白及mRNA阳性表达率分别为：20(100.00％)、18(62.07％)和19(95.00％)、16(55.20％)，蛋白表达或mRNA两者之间相比，差异均有显著性(P均＜0.05)；侵达浅肌层、深肌层和食管外膜的食管鳞癌组织中CB蛋白和mRNA阳性表达率分别为：5(50.00％)、9(60.00％)、24(100.00％)和4(40.00％)、8(53.33％)、23(95.83％)，侵犯外膜的食管鳞癌组织三者蛋白或mRNA阳性表达率均明显高于前两者，差异均有显著性(P均＜0.05)；食管鳞癌组织、非典型增生组织及正常食管黏膜组织中CB蛋白及mRNA阳性表达率分别为：38(77.55％)、8(26.67％)、0(0.00％)和35(71.43％)、7(30.43％)、0(0.00％)，蛋白表达或mRNA表达三者之间相比，差异均有显著性(P均＜0.05)。2．有无淋巴结转移组Syndecan-1蛋白及mRNA阳性表达率分别为：5(25.00％)、18(62.07％)和4(20.00％)、17(58.62％)，蛋白表达或mRNA两者之间相比，差异均有显著性(P均＜0.05)；侵达浅肌层、深肌层和食管外膜的食管鳞癌组织中Syndecan-1蛋白和mRNA阳性表达率分别为：8(80.00％)、9(60.00％)、6(25.00％)和7(70.00％)、9(60.00％)、5(20.83％)，侵犯外膜的食管鳞癌组织三者蛋白或mRNA阳性表达率均明显低于前两者，差异均有显著性(P均＜0.05)；食管鳞癌组织、非典型增生组织及正常食管黏膜组织中Syndecan-1蛋白及mRNA阳性表达率分别为：23(46.94％)、23(76.67％)、49(100.00％)和21(42.86％)、20(66.67％)、49(100.00％)，蛋白表达或mRNA表达三者之间相比，差异均有显著性(P均＜0.05)。3．有无淋巴结转移组LN蛋白阳性表达率分别为：3(15.00％)和23(79.31％)，蛋白表达两组间相比，差异有显著性(P＜0.05)；侵达浅肌层、深肌层和食管外膜的食管鳞癌组织LN蛋白阳性表达率分别为：9(90.00％)、12(80.00％)、5(20.83％)，侵犯外膜的食管鳞癌组织三者蛋白阳性表达率均明显低于前两者，差异均有显著性(P均＜0.05)；食管鳞癌组织、非典型增生组织及正常食管黏膜组织中LN蛋白阳性表达率分别为：26(53.06％)、23(76.67％)、49(100.00％)；三者癌组织蛋白阳性表达率与相应的非典型增生组织和正常黏膜组织两两相比，差异均有显著性(P均＜0.05)。4．CB与Syndecan-1及LN蛋白在食管鳞癌中的表达相关性经统计学分析，前者与后两者之间均呈负相关(r均＜0 P＜0.05)，后两者之间呈正相关(r＞0 P＜0.05)。结论1．CB蛋白和mRNA在食管鳞癌组织中呈现高表达，且CB蛋白表达或mRNA表达在不同组织、不同浸润深度及有无淋巴结转移之间的比较，差异均有显著性。推测CB高表达可能与食管鳞癌发生发展及浸润转移有关。2．食管鳞癌组织Syndecan-1蛋白及mRNA表达降低或缺失，且Syndecan-1蛋白表达或mRNA表达在不同组织、不同浸润深度及有无淋巴结转移之间的比较，差异均有显著性。提示Syndecan-1表达降低或缺失可能促进食管鳞癌发生发展及浸润转移过程。3．LN蛋白在食管鳞癌组织中表达明显降低，且LN蛋白表达在不同组织、不同浸润深度及有无淋巴结转移之间的比较，差异均有显著性。提示LN低表达可能在食管鳞癌形成及浸润转移过程中起着重要作用。4．CB与Svndecan-1及LN蛋白在食管鳞癌中的表达经统计学分析具有相关性，表明三者可能在食管鳞癌的发生、发展及浸润、转移过程中起协同作用。