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一、研究目的:探讨哮喘与过敏性鼻炎的关系;综合评价小儿喘咳液合苍耳子散的疗效及其优势,探讨并验证其抗哮喘气道重塑,防止不可逆性气道阻塞的作用及其对气道重塑主要相关生长因子、炎性介质及免疫调节作用的机制。二、研究方法(一)动物分组和造模:2-3个月的雄性Wistar大鼠135只,随机分为九组,每组各15只。哮喘空白组以生理盐水腹腔注射及雾化吸入。哮喘气道重塑模型分别于第1、8天腹腔注射新鲜配制的卵蛋白氢氧化铝溶液致敏。自第15天起对哮喘组动物进行超声雾化吸入卵蛋白溶液诱发哮喘,隔日1次,激发浓度分别是:第1、2周1%,第3、4周1.5%,第5、6周2%,第7、8周2.5%,每次激发时间为20分钟。(二)给药方法:从造模的第1天开始给予实验各组干预措施,一日1次,直至被处死,共给药70天。空白组、模型组给予生理盐水10ml/kg灌胃;西药组给予063mg/kg地塞米松灌胃给药;喘咳液小、中、大剂量组分别按10g/kg、5g/kg、2.5g/kg三个剂量给予小儿喘咳液(麻黄、桂枝、细辛、当归、五味子、蚤休等9味中药组成)灌胃给药;合方小、中、大剂量组分别按20g/kg、10g/kg、5g/kg三个剂量给予小儿喘咳合方灌胃给药(其中含小儿喘咳液及苍耳子散,苍耳子散药物由苍耳子、薄荷、白芷、辛夷组成)。三、结果1、一般情况:各组大鼠激发后,模型组、西药组、喘咳液组及合方组大鼠在吸入卵蛋白溶液后,约于1～2min开始出现较明显哮喘发作,空白对照组大鼠行动敏捷,未见异常。135只大鼠中有5只在引喘过程中死亡,其中咳喘液小剂量组及合方小剂量组在第二次致敏时各死亡1只,在引喘阶段,模型组死亡2只,西药组死亡1只,每组取10只,共90只大鼠进入结果分析。西药对照组大鼠从造模第12天开始出现多动,易激惹,咬人,21天时开始出现多毛及血便。至实验结束前,共有6只大鼠出现血便。而空白组、模型组、喘咳液各组及合方各组均无发现上述情况。2、过敏性鼻炎情况比较:在造模第21天,过敏性鼻炎叠加平均计分中模型组、西药组、喘咳液组和合方组较之空白组明显升高(P＜0.01);与模型组相比,喘咳液小剂量组计分有下降(P＜0.05),合方大剂量组的计分明显下降(P＜0.01)。在造模第70天,与空白组比较,模型组、喘咳液小剂量组计分大于五分的大鼠及比例增加(P＜0.05);与模型组比较,合方大剂量组计分大于五分的大鼠比例减少(P＜0.05)。平均计分中模型组、西药组、喘咳液各组和合方各组较之空白组明显升高(P＜0.01):西药组、喘咳液大剂量组与合方各剂量组的平均计分低于模型组(P＜0.05)。3、大鼠哮喘情况比较:在造模第15天,与模型组比较,合方大剂量组引喘时间明显延长,差异有非常显著性(P＜0.01);与西药组相比,合方大剂量组引喘时间延长,差异有显著性(P＜0.05);在实验第70天,与模型组比较,西药组、喘咳液大剂量组引喘时间增加,差异有显著性(P＜0.05);合方中、大剂量组引喘时间明显延长,差异有非常显著性(P＜0.01)。与自身前后对照,喘咳液中剂量组及合方中剂量组差异有显著性(P＜0.05),喘咳液大剂量组及合方大剂量组差异有非常显著性(P＜0.01)。合方大剂量组与喘咳液大剂量组比较,大鼠引喘时间延长,差异有显著性(P＜0.05)。在实验第70天,与模型组比较,合方小剂量组大鼠点头呼吸频度下降,差异有显著性(P＜0.05);西药组、喘咳液中、大剂量组及合方中、大剂量组大鼠点头呼吸频度明显下降,差异有非常显著性(P＜0.01)。4、血清细胞因子TGF-β1水平比较:与空白组相比,模型组大鼠血清TGF-β1水平明显上升,差异有非常显著性(P＜0.01)。与模型组相比,西药组、喘咳液各剂量组及合方各剂量组TGF-β1水平明显下降,差异有非常显著性(P＜0.01)。5、大鼠血清IFN-γ、IL-4水平及其比值比较:与空白组相比,模型组大鼠血清IFN-γ水平明显下降,差异有非常显著性(P＜0.01);与模型组相比,西药组、喘咳液及合方各剂量组IFN-γ水平明显上升,差异有非常显著性(P＜0.01);与西药组相比,喘咳液大剂量组及合方中、大剂量组IFN-γ水平明显上升,差异有非常显著性(P＜0.01)。与空白组相比,模型组及喘咳液小剂量组IL-4水平明显上升,差异有非常显著性(P＜0.01);西药组、喘咳液中、大剂量组及合方小、中剂量组IL-4水平上升,差异有显著性(P＜0.05)。与模型组相比,西药组、喘咳液各剂量组及合方小、中剂量组IL-4水平下降,差异有显著性(P＜0.05);合方大剂量组的IL-4水平明显下降,差异有非常显著性(P＜0.01);与西药组比较,合方大剂量组的IL-4水平下降,差异有显著性(P＜0.05);与喘咳液大剂量组相比,合方大剂量组IL-4水平下降,差异有显著性(P＜0.05)。与空白组相比,模型组大鼠血清IFN-γ/IL-4比值明显下降,差异有非常显著性(P＜0.01);喘咳液大剂量组及合方中、大剂量组大鼠血清IFN-γ/IL-4比值明显上升,差异有非常显著性(P＜0.01);与模型组相比,西药组、喘咳液及合方各剂量组IFN-γ/IL-4比值明显上升,差异有非常显著性(P＜0.01);与西药组相比,喘咳液大剂量组及合方中、大剂量组IFN-γ/IL-4比值明显上升,差异有非常显著性(P＜0.01)。6、大鼠血清ECP水平测定比较:与空白组相比,模型组大鼠血清ECP水平明显上升,差异有非常显著性(P＜0.01);与模型组相比,西药组、喘咳液大剂量组及合方大剂量组ECP水平下降,差异有显著性(P＜0.05)。7、大鼠体重增加情况比较:70天后与空白组、模型组、喘咳液及合方各剂量组比较,西药组体重增加明显,差异有显著性(P＜0.01)。8、支气管形态学观察:模型组气管上皮细胞水肿、脱落,气道壁不完整;腔内可见炎性渗出物和少量嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞;局部支气管黏膜下水肿,气道壁及气道平滑肌明显增厚,管腔狭窄;高倍镜下可见气道上皮下层纤维化改变,气道上皮下层可见大量梭形的成纤维细胞,平滑肌层可见肌成纤维细胞。杯状细胞增多,管腔内可见分泌物储留。西药组、喘咳液及合方各剂量组炎症减轻至消失,杯状细胞数量减少,气道平滑肌增厚及管腔狭窄减轻,高倍镜下可见纤维细胞减少。气道壁厚度比较,与空白组相比,模型组大鼠气道壁明显增厚,差异有非常显著性(P＜0.01);与模型组相比,西药组、喘咳液各剂量组及合方各剂量组气道壁厚度变薄,差异有非常显著性(P＜0.01)四、结论1、从临床症状、实验室指标以及支气管病理学检测三方面可以看出,采用卵蛋白氢氧化铝溶液致敏及卵蛋白溶液引喘建造的哮喘气道重塑模型取得成功。2、过敏性鼻炎是哮喘发生发展过程中重要的伴随因素,而且与气道重塑的形成密切相关。喘咳液组大鼠在哮喘缓解的同时,过敏性鼻炎的发生也较模型组有所下降,推测是由于过敏性鼻炎与哮喘存在共有的发病机制,在使用小儿喘咳液治疗哮喘的同时也截断了过敏性鼻炎的发生发展,从而使其发病率及症状计分随之下降。而运用小儿喘咳液合苍耳子散同时干预哮喘与过敏性鼻炎,较之单纯使用小儿喘咳液治疗哮喘,其在延长引喘时间、减少点头呼吸频度等方面有明显的优势,说明过敏性鼻炎的治疗,对于控制哮喘发生(大鼠引喘时间),减轻哮喘发作的程度(大鼠呼吸频度),有着重要的意义。3、大剂量的合方在预防和控制过敏性鼻炎症状、降低哮喘气道高反应性方面疗效较地塞米松对照组、喘咳液各剂量组及合方小、中剂量组更优,而改善呼吸困难方面则与西药组相当,优于喘咳液各剂量组及合方小、中剂量组,且其疗效随着治疗时间的延长而增加,但副作用更少,使用更加安全可靠。4、小儿喘咳液合苍耳子散能明显改善气道重塑大鼠支气管的病理改变,同时降低血清TGF-β1、IL-4、ECP水平,提高血清IFN-γ水平及失衡的IFN-γ/IL-4比值。我们推测小儿喘咳液合苍耳子散抗哮喘气道重塑的作用与其对细胞因子及炎症细胞的调节,调节免疫功能,减轻炎症反应有关。