海地瓜多糖提取纯化及其降血脂活性研究

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海地瓜(Acaudina Molpadioide)是属于海参纲芋参目(Molopadonia)芋参科(Molpadiidae)海参属(Holothuria)动物,主要分布在我国沿海海域,资源丰富。多糖是海参体壁的重要成分,具有多种生物活性功能,如抗血凝、降血脂、抑制肿瘤以及调节免疫活性等作用。目前有关海参多糖的研究对象主要集中对刺参、梅花参等经济价值较高的品种,对经济价值较低的海地瓜的多糖研究国内报道不多。本文以福建沿海海域的海地瓜为原料,较全面分析其体壁组成成分,主要研究了海地瓜多糖的提取和分离纯化工艺,分析测定海地瓜多糖主要化学组分含量,在此基础上用海地瓜多糖对小白鼠做预防性高血脂活性实验,评价其降血脂的活性功能。主要研究内容如下:1、对海地瓜的营养成分进行分析,测定了海地瓜体壁水分、蛋白质、粗脂肪、多糖和灰分的含量,其中水分含量为87.42%,干基中蛋白质含量74.67%,粗脂肪3.29%,多糖4.58%,灰分3.03%,表明海地瓜与其他海参一样是一种高蛋白低脂肪的海产品;分析了海地瓜体壁氨基酸和脂肪酸的组成,结果表明:氨基酸组成较完善,其人体必需氨基酸含量为18.54%;不饱和脂肪酸占总脂肪含量为54.80%,其ω-6系列亚油酸含量高达13.10%。此外,海地瓜体壁中含有丰富的钾、钙、钠、镁、铁、锰、锌等矿物质,尤其钙和铁含量很高。2、采用碱解结合木瓜蛋白酶解法提取海地瓜粗多糖,通过正交实验设计对海地瓜多糖提取工艺进行优化,结果表明:海地瓜于2倍体积的原料重量的4%氢氧化钠溶液在6℃提取24 h处理后再用木瓜蛋白酶水解,能提高粗多糖的提取率。采用L9(34)正交实验设计,确定酶解的最佳条件为:酶解温度55℃、酶解时间5 h、加酶量4.8×10 4 U/g、酶解液pH 6.5,粗多糖得率可达12.08%。3、粗多糖分离纯化中,比较TCA法和醋酸钾沉淀法脱蛋白效果,TCA法蛋白脱除率50.86%和多糖得率44.94%均高于醋酸钾法的29.83%和21.54%,且提高了多糖的纯度;采用葡聚糖凝胶G-100层析柱和核酸检测仪对海地瓜精制多糖进行纯化,得到一个均一多糖组分,该组分是否为糖和蛋白复合物,有待进一步研究;根据海参多糖的化学组成特点,分析测定海地瓜纯化多糖化学组成葡萄糖醛酸、氨基半乳糖、岩藻糖和硫酸基含量,分别为12.00%、17.02 %、24.57%和21.63%。4、采用预防性高血脂动物模型实验方法考察海地瓜多糖的降血脂活性,结果发现:海地瓜多糖对小鼠体重增长无影响;海地瓜多糖能显著降低高血脂小鼠血清TC、TG含量和AI值(P<0.05或P<0.01);中剂量组能有效提高小鼠血清HDL-C值和降低LDL-C值,且均达到极显著水平(P<0.01),低、高剂量组在一定程度上对HDL-C值提高和LDL-C值降低有较大影响。结果表明海地瓜多糖对高脂饮食所致小鼠血脂升高有明显抑制作用,有效预防高血脂症和动脉硬化危险。
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