【摘 要】
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采用IPTG诱导法分别对重组菌株BL21(DE3)(pET28a-K88ac-STⅡ)和BL21(DE3)(pTHioHisB-VP4-STI)进行诱导培养。后行SDS-PAGE和Western-blot检测,在表达蛋白鉴定的基础之上,通过
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采用IPTG诱导法分别对重组菌株BL21(DE3)(pET28a-K88ac-STⅡ)和BL21(DE3)(pTHioHisB-VP4-STI)进行诱导培养。后行SDS-PAGE和Western-blot检测,在表达蛋白鉴定的基础之上,通过透析的方法对目标蛋白进行纯化回收。用PEG6000调整定量蛋白的浓度均为1mg/mL,加入Al(OH)3,至10%作为铝胶疫苗,加入预先制备好的热敏感肠毒素LTB(heat-labile enterotoxin subunit B)至20ug/mL作为预制实验疫苗。分别以预制疫苗、铝胶疫苗、纯化蛋白K88ac-STⅡ/VP4-STI和PBS免疫小鼠,优化检测免疫抗体水平的间接ELISA条件,通过比较四个免疫组的抗体水平,结合攻毒实验和免疫病理变化来评价表达蛋白作为免疫抗原的有效性和热敏感肠毒素LTB作为免疫佐剂的效果。结果,两重组菌株分别在33Kda和40Kda处有特异性表达的蛋白条带,与预期分子量大小一致,菌株BL21(DE3)(pET28a-K88ac-STⅡ)的表达蛋白能够被K88ac阳性血清特异性结合,菌株BL21(DE3)(pTHioHisB-VP4-STI)的表达蛋白能够被VP4阳性血清特异性结合。纯化蛋白K88ac-STⅡ/VP4-STI在赋予LTB作为免疫佐剂的条件下能够有效地诱导小鼠产生针对共免蛋白(K88ac-STⅡ/VP4-STI)的抗体。预制疫苗攻毒存活的小鼠其回肠节段无明显的病理变化。结果表明,融合蛋白K88ac-STⅡ/VP4-STI在以热敏感肠毒素LTB为免疫佐剂的条件下对实验小鼠有很好的免疫保护效果。
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