【摘 要】
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目的：
自噬(Autophagy)由Ashford和Porter在1962年发现。自噬是普遍存在的生命现象，并与凋亡有着密切的联系。细胞通过形成自噬溶酶体降解胞内费用的蛋白及破损的细胞器。
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目的：
自噬(Autophagy)由Ashford和Porter在1962年发现。自噬是普遍存在的生命现象，并与凋亡有着密切的联系。细胞通过形成自噬溶酶体降解胞内费用的蛋白及破损的细胞器。近年，自噬同慢性退行性疾病如骨性关节炎，骨质疏松的关系引起广泛关注。糖基化终末产物(Adavanced glycation end products，AGEs)是长寿命大分子蛋白质与葡萄糖的无酶促反应产物。人体AGEs含量随年龄的增加以及在病理状态(糖尿病，肿瘤等)大幅增加。羧甲基赖氨酸(CML)是AGEs重要的结构特征和主要的作用位点。ROS(Reactive oxygen species)是AGEs病理过程中重要的中间媒介。骨组织中富含长寿命蛋白质，所以更容易受到AGEs的影响。大量研究表明AGEs能够诱导成骨细胞的凋亡。本研究的目的：1、AGEs作用下成骨细胞的自噬水平的变化。2、自噬对AGEs诱导的成骨细胞凋亡的作用3氧化应激在AGEs处理的成骨细胞凋亡与自噬过程中的作用。
方法：
制备AGE并用羧甲基赖氨酸(CML)的ELISA试剂盒检测CML的浓度。用MTT法检测不同浓度AGEs处理后MC3T3-E1细胞增殖率的变化，筛选出合适的作用浓度。用Western-blot以及免疫荧光检测不同时间AGEs处理后的MC3T3-E1内自噬水平改变。自噬对AGEs诱导凋亡的作用通过流式细胞仪检测自噬诱导剂或自噬抑制剂与AGEs共同作用下MC3T3-E1细胞的ANNEXIN-V和PI染色变化情况。细胞内ROS以及线粒体膜电位的改变分别应用DCFH-DA和JC-1试剂盒来检测。数据均以均数±标准差表示，采用SPSS17.0软件包进行统计学处理，各组间比较采用单因素方差分析，样本均数间的两两比较采用LSD-t检验，以P<0.05为差异有显著性。
结果：
在AGEs处理的MC3T3-E1中，自噬表达较正常细胞增加，并具有时间依赖性。自噬的诱导剂可以明显的抑制AGEs作用的MC3T3-E1凋亡，反之，自噬的抑制剂进一步加重了MC3T3-E1的凋亡。自噬诱导剂能够使得AGEs处理的MC3T3-E1细胞中ROS水平降低及线粒体损伤减少；自噬的抑制剂能够使得MC3T3-E1细胞中ROS水平增加及线粒体的损伤增加。在ROS的抑制剂与AGEs混合处理的MC3T3-E1中其自噬表达较AGEs单独组明显减低，差异具有统计学意义。
结论：
1.自噬在AGEs处理的成骨细胞中普遍表达，并且随着AGEs作用时间的延长而增高。
2.通过自噬诱导剂及抑制剂对成骨细胞凋亡的影响，得出自噬对AGEs所诱导的成骨细胞凋亡起到保护作用。
3.ROS以及被其损伤的线粒体的清除作用是自噬保护AGEs处理的成骨细胞凋亡的重要环节。反之细胞内ROS水平的增高是自噬启动的重要因素。
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