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蛋白质在界面上吸附取向的控制是研究蛋白质界面吸附的一个重要科学问题,控制好有利的取向是发挥蛋白质生物功能的关键。本论文以葡萄糖氧化酶为模型蛋白,研究了蛋白质在带电硫醇自组装膜表面的吸附取向,为提高葡萄糖氧化酶糖仪的精确度和稳定性提供一定的依据,同时也可为其它蛋白质界面取向控制的研究提供一些参考。
本论文第一章归纳和比较了各种用于控制蛋白质界面取向的固定化方法,总结了影响蛋白质界面吸附取向的因素,并对当前应用较多的表征蛋白质在界面吸附取向的方法进行了综述,最后对蛋白质的吸附取向研究进行了展望。
第二章对葡萄糖氧化酶在不同溶液离子强度条件下,正、负电表面的吸附取向进行了计算机分子模拟。结果表明:低离子强度(0.005 mol.L-1)中,在正电表面,葡萄糖氧化酶主要以“standing”的取向吸附在表面,而在负电表面,葡萄糖氧化酶不吸附;当溶液离子强度逐渐增大时,葡萄糖氧化酶在正电表面的可能吸附取向增加(包括“standing”、“up-lying”、“down-lying”),而在负电表面主要为“up-lying”取向。这表明离子强度是影响葡萄糖氧化酶界面的吸附取向一个重要因素。
第三章通过实验研究和第二章的模拟研究进行了对比,在金膜表面分别自组装带正电和负电的硫醇单分子膜,通过AFM表征了自组装前后的金膜;并通过SPR仪表征了葡萄糖氧化酶在带正电的氨基硫醇和带负电的羧基硫醇自组装膜上的吸附过程。对这两种自组装膜修饰的金电极吸附葡萄糖氧化酶的情况进行了电化学循环伏安法表征和交流阻抗测试,考察了溶液离子强度对葡萄糖氧化酶吸附取向的影响。实验结果表明:在低离子强度条件下,吸附在正电表面的葡萄糖氧化酶氧化还原葡萄糖的能力强,而吸附在负电表面的则较弱;随着溶液离子强度的增加,正电表面的葡萄糖氧化酶氧化还原葡萄糖的能力逐渐下降,而负电表面的则逐渐增加,但仍低于正电表面酶的氧化还原能力。葡萄糖氧化酶的氧化还原能力强说明酶是以较合适的取向吸附在表面,酶的活性发挥较好;否则,取向不利于发挥酶的活性。这个实验结果与第二章的模拟预测结果取得了良好的一致。
论文最后对葡萄糖氧化酶吸附取向实验控制进行了总结和展望。