大鼠骨髓来源与前交叉初带来源间充质干细胞体外生物学特性的比较研究

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背景:骨髓间充质干细胞(BMSCs)对于促进前交叉韧带重建术后的腱骨愈合具有积极的作用,最近的研究发现,前交叉韧带中可以分离得到间充质干细胞(ACLMSCs),并且该细胞可以体外增殖及向骨、脂肪、软骨等多向诱导分化。由于不同来源干细胞的增殖及分化潜能差异对临床的选择应用具有指导意义,而骨髓来源与前交叉韧带来源的间充质干细胞的体外生物学特性比较目前尚无明确报道。目的:比较大鼠骨髓与前交叉韧带来源的间充质干细胞体外增殖及成骨、成软骨及成脂分化潜能的差异。方法:取SPF级6周龄雄性BN大鼠10只,体质量200—220g,在无菌的条件下分别取BN大鼠前交叉韧带及骨髓,贴壁法培养获取BMSCs与ACLMSCs并进行传代,注意观察细胞形态变化,取生长良好的P3代细胞用于以下实验;体外克隆形成实验及CCK8法检测增殖能力;流式细胞仪检测细胞免疫表型;体外诱导多向分化;实时定量PCR技术检测成骨(ALP、Bglap、 Runx2、Bmp2、Spp1)、成软骨(Col2α1、Acan、Sox9)及成脂(PPARγ2及c/EBP α)相关基因mRNA表达水平。结果:P3代ACLMSCs和BMSCs形态学相似,均表现为贴壁生长的长梭形细胞。流式细胞仪检测细胞表型显示,两种细胞均表达CD29、CD90,基本不表达CD45及CD34;细胞增殖能力试验和细胞克隆形成分析显示ACLMSCs比BMSCs具有更强的体外增殖能力(p=0.023<0.05);两种干细胞均可体外诱导成骨、成脂、成软骨分化;分化相关基因检测显示ACLMSCs成软骨分化相关基因(Co12 a 1、Acan和Sox9)(p=0.0003,p=0.0020,p=0.0064)表达水平高于BMSCs。结论:本研究表明ACLMSCs比BMSCs具有更强的体外增殖能力,在相同体外条件下更易向软骨分化,是一种有潜力的促进腱骨愈合的种子细胞。
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