稀有放线菌分离方法及系统分类研究

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本文开展了稀有放线菌分离方法的研究以及对6株稀有放线菌的多相分类鉴定。为了探索稀有放线菌的分离方法,利用噬菌体S7和S3专一性感染裂解链霉菌,从而抑制大多数链霉菌的生长,结合使用预培养、预处理及选用不同抑制剂等多种手段,提高了分离平板上稀有放线菌的出菌率和多样性;分别选取NH4Cl、溴水、萘啶酮酸、利富平、硫酸庆大霉素、柱晶白霉素、木糖和棉子糖等8种抑制剂和部分碳源,研究它们对放线菌分离效果的影响,发现溴水和K2Cr2O7、棉子糖代替淀粉甘油2种处理有利于稀有放线菌的分离;比较研究了3种不同的培养基:淀粉-甘油改良培养基、脯氨酸改良培养基及高氏二号改良培养基对稀有放线菌分离的效果。实验结果发现三种营养贫乏的培养基对稀有放线菌的分离均有一定效果。其中高氏二号改良培养基分离效果最理想;海藻糖、丙烯酰胺、MOPS、对氨基苯甲酸、乙二胺四乙酸、十二烷基硫酸钠、聚乙烯醇、鞣酸和吐温80分别加入淀粉-甘油改良培养基中,比较分析9种处理对稀有放线菌的分离效果,海藻糖、丙烯酰胺、MOPS和乙二胺四乙酸分离稀有放线菌效果最理想。   采用现代细菌分类方法,对6株稀有放线菌进行了多相分类研究。通过形态观察、培养特征观察、生理生化试验、化学组分的定性分析、DNAG+Cmol%测定、DNA-DNA杂交、16SrDNA全序列分析以及系统发育学分析等多项研究,从表型、基因型和系统发育三个层次比较分析,最终确定了它们的分离地位。其中,YIM43848,YIM43845,YIM43843,YIM43815归入同一个种——假诺卡氏菌属的一个新种并根据其分离地点,建议命名为Pseudonocardiadiaolingensis(刁岭假诺卡氏菌)。菌株YIM43847与Nocardiaignorate同源性达到98.8%。为YIM43847是Nocardiaignorate的一个菌株。
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