人偏肺病毒在不同细胞的复制动力学

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第一部分人偏肺病毒在不同细胞的复制动力学目的寻找出适合培养和分离hMPV的细胞。方法采用hMPV A亚型标准株hMPV/NL/1/00和B亚型标准株hMPV/NL/1/99分别接种于Vero细胞、Vero-E6细胞、LLC-MK2细胞、A549细胞和HEp-2细胞,接种后逐日观察CPE,并于第2、4、6、8、10、12、14、16、18、20天从细胞中提取RNA并作逆转录,所获得的cDNA采用hMPV型特异性的探针及引物进行实时荧光定量PCR的检测。结果接种病毒后3天可在Vero细胞、Vero-E6细胞、LLC-MK2细胞和A549细胞中观察到CPE,不同亚型的hMPV所致的CPE没有差别,但在Vero-E6细胞中CPE更易观察。hMPV可以在Vero细胞、Vero-E6细胞和LLC-MK2细胞中稳定有效地复制,不能在A549细胞和HEp-2细胞中稳定传代,两种亚型的hMPV病毒载量均在Vero细胞中达到最高。结论Vero细胞、LLC-MK2细胞和Vero-E6细胞均是适合培养和分离hMPV的细胞。A549细胞和HEp-2细胞不适合作为常规培养hMPV的细胞。第二部分用不同细胞从鼻咽分泌物中分离人偏肺病毒的研究目的用临床标本进行实验,以评价第一部分获得的结果。方法采用已经证实有hMPV感染的患儿的鼻咽分泌物标本(A、B亚型各两个)分别接种于Vero细胞、Vero-E6细胞、LLC-MK2细胞、A549细胞和HEp-2细胞,接种后逐日观察CPE,并于第2、4、6、8天从细胞中提取RNA并作RT,所获得的cDNA采用hMPV型特异性的探针及引物进行实时荧光定量PCR的检测。结果(1)接种后在所有的细胞中都没有观察到CPE。(2)一个hMPV A亚型标本在接种后2天在Vero-E6细胞和HEp-2细胞中检测到,接种后8天在五种细胞中均检测不到;另一个hMPV A亚型标本在接种后2天五种细胞中都可以检测到,Vero-E6细胞中病毒拷贝数最高,接种后8天在3种细胞中仍可检测到,Vero-E6细胞中病毒拷贝数最高。(3)两个hMPV B亚型标本接种后2天可在五种细胞中检测到,在HEp-2细胞和LLC-MK2细胞中病毒拷贝数最高;接种后8天能在四种细胞中检测到,在LLC-MK2细胞和Vero细胞中病毒拷贝数最高。结论Vero-E6细胞适合分离A亚型hMPV,LLC-MK2细胞适合分离B亚型hMPV。HEp-2细胞不适合用于分离hMPV。
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