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目的 利用双侧上丘逆行标记法观察荧光染料Dil逆行标记视网膜神经节细胞的有效性及其正常值;并通过观察不同模型大鼠视网膜神经节细胞轴突的再生情况,以探讨睫状神经营养因子对大鼠视神经再生的影响。 方法 (1)采用上丘立体定位注射法,将荧光染料脂溶性花青染料(1,1′-dioctadecyl-3,3,3′-tetramethylindocarbocyanine perchlorate,DilC18(3);Dil)注射到18只正常SD(Sprague-Dawley)大鼠的双侧上丘,Olympus荧光显微镜下观察标记后不同时期大鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)密度值。(2)分别建立视神经自身吻合和视神经-坐骨神经吻合模型,并在视神经-坐骨神经吻合模型大鼠玻璃体内注射平衡盐溶液(Balance salt solution,BSS)或睫状神经营养因子(Ciliary neurotrophic factor,CNTF),其后不同时期,利用荧光染料逆行标记的方法观察不同模型大鼠RGCs轴突再生的情况。 结果 1.Dil经双侧上丘逆行标记后第3d即可在视网膜上见到明亮的红色细胞,随标记时间延长,标记细胞密度增加,标记后3d、7d、14d和30d测得的RGCs密度值分别为1404±23/mm2、1642±51/mm2、1757±70/mm2和1602±56/mm2,相邻两时间段之间的差别均有显著性意义(P<0.01)。 2.视神经自身吻合模型中除第14d一只大鼠的视网膜中见到一Dil标记的RGCs样细胞外,其余时间段的大鼠视网膜上均未见到明显的荧光标记细胞。 3.视神经-坐骨神经吻合模型中,第3d无明显的Dil标记细胞。第7d和第14dDil标记细胞密度值分别为152士26/nunZ和297士31/mmZ,分别与同期的视神经自身吻合组相比,差别均有显著性意义(尸<0.01)。 4.视神经一坐骨神经吻合并玻璃体内注射BSS组第3d无Dil标记细胞,第7d和第14d细胞密度分别为260士40/mlnZ和350士52/mm2,其中第7d与同期的视神经一坐骨神经吻合组相比,差别有显著性意义(尸<0.01),第14d与同期的视神经一坐骨神经吻合组相比,差别无显著性意义(尸>0.05)。 5.视神经一坐骨神经吻合并玻璃体内注射CNTF后3d无Dil标记细胞,第7d和14d Dil标记细胞密度分别为446士49/mm2和560士74/InlnZ,分别与同期的Bss组比较,差别均有显著性意义(尸<0.01)。 结论 1.荧光染料Dil是特异性标记RGCs的有效染料,标记后第1 4d测得的细胞密度值可作为大鼠正常的RGcs密度值,即1 757士70/二2。 2.视神经损伤并吻合一段自身视神经后,可能有个别的RGCs轴突可以再生并持续通过了切断区,但如此微弱的再生对视功能的建立是没有意义的。 3.视神经损伤并吻合一段坐骨神经后,坐骨神经可能提供有利于视神经再生的微环境,促进损伤的RGCs轴突长入移植的周围神经。 4.吻合一段坐骨神经并应用外源性CNTF后,可明显的促进RGCs轴突再生,其作用在应用CNTF后Zw仍存在。