【摘 要】
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目的:观察体外培养大鼠视网膜muller细胞在高糖培养环境下谷氨酰胺合成酶(glutamamine synthetase, GS)的表达变化,探讨重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoiet
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目的:观察体外培养大鼠视网膜muller细胞在高糖培养环境下谷氨酰胺合成酶(glutamamine synthetase, GS)的表达变化,探讨重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin, rhEPO)对其表达的影响及作用机制。方法:取出生5-7天新生SD大鼠视网膜,经胰酶消化后分离纯化视网膜muller细胞。预实验用台盼蓝染色观察不同浓度葡萄糖对视网膜:muller细胞形态、生长状态及存活数的影响,确定高糖浓度。将视网膜,muller细胞随机分为6组:正常对照组、高糖培养组和不同浓度rhEPO处理高糖组,分别在高糖培养液中加入终浓度为5、10、20、40U/ml rhEPO。48h后TUNEL法检测rhEPO对高糖对视网膜muller细胞的凋亡的影响,并通过免疫细胞化学方法半检测不同浓度rhEPO干预高糖作用下muller细胞GS蛋白的表’达水平。结果:1、经免疫细胞化学染色鉴定,所培养细胞大部分为视网膜muller细胞。2、TUNEL法检测结果示:muller细胞在高浓度葡萄糖条件下活性下降并出现大量凋亡细胞,rhEPO干预48h后,随着rhEPO浓度的增加凋亡细胞明显减少(P<0.05)。3、细胞免疫组化法检测结果显示:高糖环境下muller细胞GS蛋白表达下降,rhEPO干预48小时后,实验组mUller细胞中GS的表达随rhEPO浓度的升高而逐渐升高(P<0.05)。结论:rhEPO对高糖作用下mUller细胞的凋亡具有保护作用,加入rhEPO干预后GS蛋白的表达明显增加,从而促进了谷氨酸的循环,有效降低谷氨酸浓度,可能间接抑制高浓度谷氨酸对神经节细胞的兴奋性毒性作用导致的细胞凋亡,从而保护视网膜功能的正常。
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